7.1.3.30 아닐라진(Anilazine)

가. 시험법 적용범위곡류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 메탄올성 수산화나트륨용액으로 추출한 후 실리카 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 측정한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD) 또는 질소․인 검출기(GC-NPD)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 및 액체크로마토그래프용

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 물

3) 셀라이트 545(celite 545), 실리카 60(silica 60, 0.2～0.5 μm)

4) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 메탄올성 수산화나트륨용액 : 메탄올을 사용하여 0.5 M 수산화나트륨용액으로 조제한다.

6) 표준품(Anilazine) : 아닐라진 1 g을 정확히 달아 플라스크에 넣고 이에 메탄올성 수산화나트륨용액 50 mL를 넣어 녹인 후 실온에서 약 1시간 동안 저어 섞는다. 이후 용액을 증발시키고 잔류물을 디클로로메탄과 아세톤 혼합용액으로 녹여 물로 2～3회 세척하고 유기층을 분리하여 건조시킨 후 40℃에서 농축하여 결정을 얻어낸다. 이것을 사이클로헥산으로 2회 정도 재결정하여 표준품으로 사용한다(m.p. 102℃).

7) 표준원액 : 아닐라진의 표준품을 에틸아세테이트에 녹여 100 mg/L가 되게한다.

8) 표준용액 : 표준원액을 에틸아세테이트를 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 50 g을 달아 메탄올성 수산화나트륨용액 200 mL를 넣고 잘 섞은 후 실온에서 1시간 방치한다. 이후 3분간 강하게 흔들고 여과한 후 잔류물(residue)을 메탄올 100 mL로 세척하여 위의 용액에 혼합한다. 이 용액을 55℃에서 감압 농축기로 증류하여 메탄올을 제거한다. 수용액을 분액깔때기에 옮기고 15% 염화나트륨용액 200 mL를 넣은 후 디클로로메탄 : 아세톤(4 : 1) 혼합액 150 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞고 정치하여 층을 분리한다. 물층에 다시 디클로로메탄 : 아세톤(4 : 1) 혼합액 100 mL를 넣고 위와 같이 되풀이 한 후 디클로로메탄 : 아세톤(4 : 1) 혼합액을 합쳐 추출한다. 추출액을 무수황산나트륨으로 건조시키고 40℃에서 농축, 건고하고 잔류물을 톨루엔 10 mL에 녹인다.

2) 정제
직경 1.5 cm의 컬럼에 실리카 15 g과 무수황산나트륨 5 g을 톨루엔으로 충전시킨 후 ’1)추출’로부터 얻은 톨루엔 10 mL를 충전물질에 흡착시킨다. 이후 플라스크를 10 mL의 사이클로헥산으로 세척하여 컬럼에 흘리고 사이클로헥산 30 mL를 더 흘려준다. 이후 사이클로헥산 : 에틸아세테이트(85∶15) 혼합액 50 mL를 유출시켜 버리고 사이클로헥산 : 에틸아세테이트(70 : 30) 혼합액 100 mL로 디메톡시아닐라진을 용출하여 받는다. 이 용출액을 40℃에서 농축․건조하여 잔류물을 에틸아세테이트 일정량에 녹여 시험용액으로 사용한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 분석조건

가) 충전컬럼(packed column)

(1) 고정상담체 : 기체크로마토그래프용 크로모솔브 W(AW-DMCS), 크로모솔브 G(AW-DMC 및 가스크롬 Q(60～80 메쉬(mesh), 80～100 메쉬(mesh)) 또는 이와 동등한 것

(2) 고정상액체 : 100% Methyl siloxane, 50% Phenyl 50% Methyl siloxane, 50% Cyanopropylphenyl 50% Methyl siloxanex 2% DEGS(Stabilized)를 3～5%로 입힌 것 또는 이와 동등한 것(7. 식품 중 잔류농약 시험법, 7.1.2.1의 바. 시험조작 중 ｢사용이 가능한 동등한 컬럼｣ 참조)

(3) 컬럼 : 안지름 2～3 mm, 길이 100～200 cm의 유리관

나) 모세관 컬럼(capillary column) : 0.2～0.32 또는 0.53 mm의 안지름을 가지는 30 m의 모세관 유리 컬럼에 적합한 고정상액을 화학결합 시키거나 cross-link 코팅한 것

다) 주입부 및 검출기의 온도 : 각각 250℃, 300℃

라) 오븐 온도 : 처음 100℃에서 시료용액을 주입한 후 2분간 유지하고 20℃/분의 비율로 230℃까지 상승시킨 후 20분간 유지한다.

마) 이동상가스 및 유속 : 디메톡시아닐라진이 약 4분에서 유출하는 속도로 질소(N2)의 유속을 조절한다.

2) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 분석조건에서도 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.