7.1.3.32 에테폰(Ethephon)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 에틸아세테이트로 추출한 후 메틸화 반응을 거쳐 기체크로마토그래프로 측정한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프
-질소․인 검출기(GC-NPD)

2) 기체크로마토그래프
-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매∶잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물∶3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액∶표준품을 아세톤에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액∶표준원액 1 mL를 취하여 플라스크에 넣고 실온에서 질소가스를 사용하여 증발건고 시킨 후 마. 시험용액의 조제 2) 메틸화에 따라 실험하고 아세톤으로 적절한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

5) 기타시약∶잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 1 N 염산 10 mL를 넣어산성화 시킨 후 무수황산나트륨 70 g을 넣어탈수하고 에틸아세테이트 100 mL를 넣어15분간흔들어 섞어 추출한다. 추출액을 부흐너깔때기로 흡인 여과한 후, 에틸아세테이트 20 mL로 용기 및 잔류물을 씻어 앞의 여과액과 합하여 40℃ 이하에서 감압 농축한다. 농축 건고물을 아세토니트릴 50 mL에 녹인 후 250 mL 분액깔때기에 옮기고, 헥산 30 mL를 넣어2분간강하게 흔들어 섞은 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 분리된 아세토니트릴층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받은 후 40℃ 이하에서 감압 농축한다.

2) 메틸화
농축에 의해 얻어진 건고물은 메탄올 4 mL를 넣어녹인 후, 이중 2 mL를 시험관에 취한다. 여기에 2 N-트리메틸실릴다이아조메탄 용액 1 mL를 넣고 실온에서 30분간 메틸화한다. 메틸화에 의해 얻어진 용액을 100 mL 분액깔때기에 옮기고, 5% 염화나트륨 수용액 30 mL 및 헥산 25 mL를 넣어2분간강하게 흔들어 섞은 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 분리된 수용액층을 취한다. 수용액에 디클로로메탄 25 mL를 넣어2분간강하게 흔들어 섞은 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 과정을 1회 반복하여 앞서 받은 디클로로메탄층과 합한 후 40℃ 이하에서 감압 농축한다. 최종적으로 농축에 의해 얻어진 잔류물은 아세톤 2 mL로 녹여 시험용액으로 사용한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼∶DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유속 : 질소(N2), 1 mL/분

다) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입하고 3분간 유지한 후 5℃/분의 비율로 90℃까지 온도를 상승시켜 5분간 유지하고 10℃/분의 비율로 150℃까지 온도를 상승시켜 10분간 유지한다.

라)주입부 온도 : 250℃

마)검출기 온도 : 300℃

바) 주입량 : 1 μL, splitless mode

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.

에테폰(12.1분)

4) 정량한계
0.05 mg/kg

사.정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 에테폰을 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의
분석조건

가)컬럼 : DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나)이동상가스 및 유속: 헬륨(He), 1 mL/분

다) 오븐 온도: 60℃에서 시험용액을 주입하고 10℃/분의 비율로 온도를 180℃로 상승시켜 1분간 유지하고 30℃/분의 비율로 250℃까지 온도를 상승시켜 2분간 유지한다.

라)주입부 온도: 250℃

마)인터페이스 온도 : 250℃

바)분자량 범위 : 50～650m/z

사)주입량 : 1 μL, splitless mode

아)기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
에테폰 (Ethephon)	8.4	144.5	145.0	109, 113