7.1.3.36 피메트로진(Pymetrozine)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 Borax 완충용액으로 pH를 조절한 후 메탄올로 추출하고, 디클로로메탄으로 액-액 분배한다. 실리카 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 및 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴로 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 실리카 카트리지(silica cartridge) : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 Borax 완충용액 15 mL 및 메탄올 100 mL를 넣고 15분간 흔들어 섞는다. 추출물은 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 여과보조제(Celite 545) 10 g을 이용해 흡인 여과한다. 잔류물은 메탄올 50 mL로 씻고 씻은 여과액은 위의 여과액에 합한 다음 메탄올을 넣어 200 mL로 하고 그 중 100 mL를 취하여 40℃ 이하에서 감압하여 약 5 mL 정도가 남을 때 까지 농축한다. 잔류물을 포화 염화나트륨용액 50 mL를 이용하여 분액깔때기로 옮기고, 1 N 수산화나트륨용액 1 mL와 디클로로메탄 100 mL를 넣어 5분간 흔들어 섞은 다음 정치하여 디클로로메탄층을 취한다. 다시 물층에 디클로로메탄 100 mL를 넣어 위와 같은 과정을 2회 되풀이 한 후 위의 디클로로메탄층에 합하고 무수황산나트륨을 넣어 탈수시킨 다음 40℃ 이하에서 감압 농축한다. 잔류물은 디클로로메탄 5 mL에 녹인다.

2) 정제
미리 실리카 카트리지에 디클로로메탄 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 추출액을 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 버리고 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트 10 mL로 유출시켜 버린 후, 메탄올 : 에틸아세테이트(5 : 95) 20 mL를 넣어 용출시켜 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축 후 잔류물에 30% 메탄올을 넣어 최종부피 5 mL가 되게 한 후 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 측정조건

가) 컬럼 : C8(Capcell pak UG120, 4.6 mm × 250 mm, 5.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼 온도 : 40℃

다) 이동상 : 메탄올과 물(30 : 70)의 혼합액

라) 이동상 유속 : 0.8 mL/분

마) 검출파장 : 300 nm

바) 주입량 : 20 μL

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.

피메트로진

4) 정량한계
0.03 mg/kg

사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 이온으로 피메트로진을 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기 측정조건

가) 컬럼 : C8(Unison UK, 2.0 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼 온도 : 40℃

다) 이동상 : 메탄올과 물(30 : 70)의 혼합액

라) 이동상 유속 : 0.2 mL/분

마) 주입량 : 1 μL

바) 이온화 : ESI positive-ion mode

사) 분자량 범위 : 50～300m/z

아) Cone voltage : 35 V

분석성분 (Compound)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion,m/z)	생성이온(Product ion,m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
피메트로진 (Pymetrozine)	217.2	217.0	218	105	27
				78	59
				79	59