2.1.4.1.1 단당류 및 이당류

가. 여지크로마토그래프에 의한 정성

1) 시약

가) 전개용매

(1) n-부탄올：초산：물(4：1：2)

(2) n-부탄올：피리딘：물(6：4：3)

나) 발색액

(1) 암모니아성질산은용액

n-부탄올에 동량의 10% 암모니아수를 가하여 흔들어 섞고 정치한 다음 상층을 취하여 질산은의 분말을 2%의 비율로 가하여 녹이고 필요하면 상층부를 분리하여 사용한다. 쓸 때에 만든다.

(2) ρ-아니시딘염산용액：부탄올․에탄올․물(4：1：1)혼액에 ρ-아니시딘염산염을 3%, 염화제일주석을 약 0.01%의 비율로 가하여 녹인다.

(3) 레소르신․염산용액：1% 레소르신․에탄올용액에 동량의 0.2 N 염산을 가한다.

2) 시험방법

가) 검액의 조제

검체중의 당량에 따라 그 일정량(1～5 g)을 취하여 막자사발에 옮기고 50% 에탄올 20～50 mL를 가하여 섞어서 균등한 시럽상으로 한다. 다음 이를 원심분리하고 상등액이 필요하면 여과지를 사용하여 여과하여 검액으로 한다. 검액 중의 당량은 1～4% 정도가 적당하다.

나) 전개

검액 및 대조의 당액 2～5 μL를 마이크로피펫 또는 유리모세관을 사용하여 여과지에 찍고 1) 시약 가) 전개용매 (1) 또는 (2) 중의 어느 것을 사용하여 상승법에 따라 전개를 한다.

다) 발색

3) 시약 나) 발색액 (1) 또는 (2) 중의 어느 것을 분무한 다음에 100～105℃에서 5～10분간 가열하여 발색시킨다. 이당류는 110～120℃에서 10～15분간 정도 가열하지 않으면 반점을 명확하게 인정하기 곤란하다. 나) 발색액 (1)은 갈색～흑갈색의 반점이 나타나고 (2)는 당의 종류에 따라서 다르나 황～적갈색의 반점이 나타난다. 발색액 (3)은 케토오스 또는 자당의 검출에 사용한다. 어느 경우에도 대조의 당류 Rf값 색조와 비교하여 정성한다.

정색시약 당 류	발색액(1) 암모니아성질산은	발색액(2) ρ-아니시딘염산	발색액(3) 레소르신염산
알도펜토오스 알도헥소오스 케토헥소오스 유당 맥아당 자당 우론산	흑갈색 갈색 갈색 다갈색 다갈색 - 갈색	적갈색 황갈색 황색 담황갈색 담황갈색 담황갈색 도적색	- - 적색 - - 적색 -

전개할 때 대조의 당액을 쓰는 이유：검액 중의 당의 종류가 미지일 경우에는 보통 식품 중에 존재하기 쉬운 당류 즉 포도당, 과당, 자당, 유당 및 맥아당을 대조용액으로 하고 그의 농도는 1～2%로 한다.

Rf값에 있어 당류의 Rf값은 여과지의 종류, 전개온도 등에 좌우되므로 표Ⅱ에 나타낸 값은 참고 정도로 하고 시험을 할 때에는 반드시 대조의 당류 Rf값과 비교하여 판정하도록 한다.

전개액 당 류	n-부탄올：피린딘：물 (6：4：3)	n-부탄올：초산：물
		(4：1：5)	(4：1：2)
D-글루코오스 D-갈락토오스 D-만노오스 D-후락토오스 D-키실로오스 D-알라비노오스 D-리보오스 L-람노오스 유당 맥아당 자당 D-글루클론산 D-글루클로노락톤 D-글루코사민염산염 D-갈락토사민염산염	0.39 0.34 0.46 0.42 0.50 0.43 0.56 0.59 0.24 0.32 0.40 0.16 0.72 0.32 0.28	0.18 0.16 0.20 0.23 0.28 0.21 0.31 0.37 0.09 0.11 0.14 0.12 0.33 0.13 0.12	0.30 0.28 0.35 0.33 0.36 0.36 - 0.46 0.17 0.19 0.23 - 0.42 0.28 -