6.12.1.5 전화당 및 자당

가. 레인․에이논법

1) 전화당

검체 26 g을 정확히 달아 물에 녹여 250 mL의 메스플라스크에 옮겨 넣고 알루미나크림시액 5 mL를 가하여 물을 표선까지 채운다음 여과하고 여액 10 mL를 취하여 250 mL로 희석해서 검액으로 한다.

페링시액 A 및 B의 각각 5 mL와 물 10 mL를 200 mL의 삼각플라스크에 취하고 이에 검액 약 15 mL를 가하여 석면금망상에서 2분이내 끓이고 화력을 조금 약하게 하여 황산동의 색이 거의 퇴색하면 1% 메틸렌블루시액 4 방울을 가하여 더 끓이면서 메틸렌블루의 청색이 없어질 때까지 떨어뜨린다.

적정의 종말점 부근에서 1방울씩 떨어뜨려 과량이 되지 않도록 주의하여야 하며 적정은 끓기 시작한 후 3분이내에 끝내도록 한다. 적정 예정량을 알기 위하여 예비시험을 하고 본 시험에 있어서 종말에 떨어뜨리는 검액의 양은 1~2 mL가 되게 한다.

총 적정량으로부터 부표중의 레인․에이논 전화당 정량표에 의하여 검액 100 mL중의 전화당량(A)을 구하고 다음식에 의하여 함량을 산출한다.

전화당(%) ＝ A × f ×

f ∶페링시액 A액의 역가

S∶검체 채취량(g)

2) 자당

검체 26 g을 정확히 달아 소량의 물로 녹여 100 mL의 메스플라스크에 옮겨 넣고 알루미나크림시액 5 mL를 가한다. 다음 물을 표선까지 채우고 여과한다.

이 액 50 mL에 물 25 mL 및 20% 염산 10 mL를 가하여 67℃에서 전화시킨 다음 탄산나트륨으로 중화하고 물을 가하여 100 mL로 하여 이 액 10 mL를 메스플라스크로 250 mL로 희석한 것을 검액으로 하여 전항 1) 전화당에 따라 시험하여 전화당의 양을 구하고, 이 전화당량에서 전항 1)의 전화당 양을 뺀 것에 0.95를 곱하여 자당의 양을 산출한다.

나. 액체크로마토그래프

1) 시약

가) 이동상∶아세토니트릴∶물(75∶25)

나) 표준당용액∶포도당 및 과당 각 1 g, 자당 0.1 g을 정밀히 달아 100 mL의 메스플라스크에 넣고, 물에 녹여 표선까지 채운다.

2) 장치

가) 검출기∶시차굴절계(Rl)

나) 칼럼∶카보하이드레이트

다) 용매여과기∶solvent clarification kit나 그와 동등한 것

3) 시험용액의 조제

검체 약 1 g을 정밀히 달아 100 mL의 메스플라스크에 물 25 mL로 녹여 옮기고, 아세토니트릴로 표선까지 채워 여과(0.45μm 여과지)하여 시험용액으로 한다.

4) 시험조작

(액체크로마토그래피의 측정 조건의 예)

○ 유량∶1.0~1.5 mL/min

○ 시험용액주입량∶10~20μL

○ 감도(attenuation)∶8×

시험용액 및 당 표준용액 각 10~20μL를 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 피크의 높이 또는 면적으로 다음 식에 따라 검체중의 전화당(포도당＋과당) 및 자당의 양을 산출한다.

	당(%) ＝	pH	×	V	×	W1	× 100
		pH′		V1		W

pH, pH′∶검액과 표준액의 높이 또는 면적

V, V1∶검액과 표준액의 전량(mL)

W, W1∶검체 및 표준당의 채취량(g)