8.3.90 요오드퀴놀린설폰산(Iodo hydroxy quinolinesulfonic acid)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 아세트산이 함유된 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 100 mL 용량플라스크에 요오드퀴놀린설폰산 표준품을정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라)표준용액: 100 mL 용량플라스크에 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한농도가 되게 하여 사용한다.

마)0.1% 아세트산(Acetic acid) 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 아세트산 1 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바)0.1% 아세트산 함유 메탄올용액:1,000 mL 용량 플라스크에 아세트산1 mL를 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

사) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고, 0.1% 아세트산 함유 아세토니트릴용액8 mL를 가하여 10분간 진탕 혼합한 후 4℃에서 2,600G로 15분간원심분리하여 상층액 ⓐ를 취한다. 잔류물에 다시 0.1% 아세트산 함유 아세토니트릴을 7 mL를 가하여 10분간 진탕하고 4℃에서 2,600G로 15분간 원심분리하여 상층액 ⓑ를 취한다. 새로운 50 mL 원심분리관에 상층액 ⓐ와 ⓑ를합한 후 헥산 15 mL를 가하여 10분간 진탕하고 4℃에서 2,600G로 15분간원심분리한다. 하층액을 취하여 40℃ 수용액상에서 0.3 mL이 될 때까지 질소농축한 후 0.1% 아세트산 수용액:0.1% 아세트산 함유 메탄올(1:1, v/v) 혼합용액 2.2 mL을 가하여 재분산한다. 4℃에서 15,000G로 10분간 원심분리 한 후 상층액을 0.45 μm 막 여과지(PTFE membrane filter)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼: C18(Xbridge 2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A: 0.1% 아세트산 용액

(나) 이동상 B:0.1% 아세트산 함유 메탄올용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
3	95	5
5	5	95
12	5	95
15	95	5
20	95	5

(3) 유속: 0.25 mL/분

(4) 칼럼온도: 35℃

(5) 주입량: 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization: ESI(Negative)

(2) Capillary Temperature: 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy,eV)
요오드퀴놀린설폰산 (Iodo hydroxy quinolinesulfonic acid)	9.28	351.1	349.7	223.0	-38
				159.1	-40
				80.0	-90

※ 밑줄 표시되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을비교하여그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1). 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %∼≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %∼≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 요오드퀴놀린설폰산 표준품의 크로마토그램(9.28분, 0.05 mg/L)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

요오드퀴놀린설폰산(Iodo hydroxy quinolinesulfonic acid) : 0.005 mg/kg