8.3.97 브로모프로필레이트(Bromopropylate)

1) 시험법 적용범위

축산물 등(벌꿀 포함)에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출하고 C18분말로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 100 mL 용량플라스크에 브로모필레이트 표준품을 정밀히 달아5 mM 개미산암모늄 함유 메탄올 용액으로 녹여100 mg/L가 되게 한다. 조제된표준원액은 냉동 보관한다.

라) 표준용액: 100mL 용량플라스크에표준원액을 5 mM 개미산 암모늄 함유 메탄올 용액으로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 5 mM 개미산 암모늄(Ammonium formate) 함유 메탄올 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 암모늄 315.3 mg을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

바) 5 mM 개미산 암모늄 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 암모늄 315.3 mg을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 꿀을 제외한 축산물

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 황산마그네슘 4 g과 아세토니트릴 15 mL를 가하여 15분간 진탕한 후, 2,000G에서 10분간 원심분리한다. 새로운 원심분리관에 상층액을 취하고 C18분말 500 mg을 첨가하여 분산시킨 후 30 초간 진탕한다. 2,000G에서 5분간 원심분리 후 상층액 6 mL를 새로운 원심분리관에 취한 후 50℃에서 질소농축한다.5 mM 개미산 암모늄 함유 메탄올 용액0.4 mL를 가한 뒤 0.2 μm 막여과지(PTFE membrane filter)로여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

나) 꿀

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 물 2 g를 가한 후 1분간 진탕한다. 여기에 염화나트륨 2 g과 아세토니트릴 8 mL를 가하여 15분간 진탕한 후, 2,000G에서 10분간 원심분리한다. 새로운 원심분리관에 상층액을 취하여 C18분말 500 mg을 분산시킨 후 30 초간 진탕하고 2,000G에서 5분간 원심분리한다. 새로운 원심분리관에 상층액을 모두 취하여 50℃에서 질소농축한다.5 mM 개미산 암모늄 함유 메탄올 용액0.4 mL를 가한 뒤 0.2 μm 막여과지(PTFE membrane filter)로여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(Kinetex, 2.1 × 100 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A:5 mM 개미산 암모늄 용액

(나) 이동상 B:5 mM 개미산 암모늄 함유 메탄올 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	35	65
4	5	95
9	5	95
9.1	45	65
11.5	45	65

(3) 유속: 0.3 mL/분

(4) 칼럼온도: 45℃

(5) 주입량: 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization: ESI(Positive)

(2) Capillary temperature: 250℃

(3) Collision gas: Ar(아르곤)

(4) 분석대상물질의 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy,eV)
브로모프로필레이트 (Bromopropylate)	3.7	428.1	446.0	324.8	23
				209.0	39

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤20 %
> 20 %∼≤ 50 %	≤25 %
> 10 %∼≤ 20 %	≤30 %

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 브로모프로필레이트 표준품의 크로마토그램(3.7분, 0.01 mg/L)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

브로모프로필레이트(Bromopropylate): 0.005 mg/kg