8.3.98 이소유게놀(Isoeugenol)

1) 시험법 적용범위

어류 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출하고, SPE 카트리지로 정제한 후 기체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

기체크로마토그래프/질량분석기(GC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 100 mL 용량플라스크에 이소유게놀 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 표준용액 :100mL 용량플라스크에표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한농도가되게 한다.

마) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 10 mL를 가하여 15분간 진탕한 후 2,200G에서 10분간 원심분리한다. 새로운 원심분리관에 상층액 4 mL를 취한 후 물 30 mL를 넣고 5분간 진탕하여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 2 mL와 물 2 mL로 활성화 시킨 C18카트리지에 추출액을 흡착시킨다. 물 2 mL로 세척한 후, 감압하여 물을 완전히 제거하고, 2 mL의 메탄올로 용출하여 15 mL 원심분리관에 취한다. 무수황산나트륨 500 mg을 가하여 5분간 진탕하고, 상층액 1 mL를 마이크로 원심분리기 튜브에 취한다. 2,200 G에서 2분간 원심분리한 후0.2 μm 막여과지(PTFE membrane filter)로여과시킨 것을 시험용액으로 한다

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：HS-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 운반기체(Carrier gas) 및 유량 : 헬륨(He),1 mL/분

(3) 주입부 온도: 280℃

(4) 주입량: 1 µL

(5) 주입모드: Split mode(2:1, split ratio)

(6) 오븐온도:

시간 (분)	온도 (℃)	유지시간 (분)
0	120	2
7	190	0
10	280	10

나) 질량분석기 조건

(1) 이온 모드: EI

(2) 인터페이스 온도: 280℃

(3) 이온에너지: 70 eV

(4) 모드: SIM

(5) 분석대상물질의 개별 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	생성이온 (Fragment ion, m/z)
이소유게놀 (Isoeugenol)	5.8	164.1	164.1
			103.2
			131.1

※밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※각 생성이온(Fragment ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 생성이온(Fragment ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여그 비율은주1)과일치하여야 한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 10 %
> 20 %∼≤ 50 %	≤ 15 %
> 10 %∼≤ 20 %	≤ 20 %

나) 표준품 크로마토그램

이소유게놀 (isoeugenol)

그림 1. 이소유게놀(5.8분, 0.01 mg/kg) 표준품의 크로마토그램

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온 (Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

이소유게놀(Isoeugenol) : 0.005 mg/kg