8.3.99린코마이신(Lincomycin)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 린코마이신을 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가)용매 : 액체크로마토그래프용또는 이와 동등한 것

나)물 : 3차 증류수 또는 이와동등한 것

다) 표준원액 : 린코마이신 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

마) 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) : 500 mL 메스플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․H2O) 5.11 g과 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 1.68 g을 달아 증류수로 녹여 표시선까지 채운다.

바) C18카트리지(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

가) 유

균질화한 검체 2 g에 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL를 넣어 균질화하고 1 M 수산화나트륨용액 120 μL를 넣어 10초간 흔든 후 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕한 다음 1,000G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 중 4 mL를 취하여 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소농축한 후 잔류물은 이동상 1 mL에 녹인 후 막 여과지(membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 알

균질화한 검체 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕하고 5분간 초음파 추출한 후 1,000G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충용약(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소농축한 후 잔류물은 이동상 1 mL에 녹인 후 막 여과지(membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

다) 유, 알을 제외한 식품

균질화한 검체 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 완전히 혼합한 후 1,000G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소농축한 후 잔류물은 이동상 1 mL에 녹인 후 막 여과지(membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼：C18(2.1 × 50mm, 1.9 μm) 또는 이와동등한 것

(나) 이동상

①이동상 A : 0.1% 개미산,5% 아세토니트릴 수용액

②이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	100	0
3.0	100	0
4.0	80	20
7.0	10	90
13.0	10	90
14.0	100	0
22.0	100	0

(다) 유속 : 0.2 mL/분

(2) 질량분석기 조건

(가) Ionization : ESI(positive)

(나) Spray voltage : 5 kV

(다) Capillary temperature : 280℃

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액을 위의조건에 따라 질량분석기에 주입한다. 얻어진 각 피크의머무름 시간(retention time)을비교하고 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 린코마이신의 함량을 구한다.

물질	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)
린코마이신	407	124, 126, 359