9.8.4 기억상실성 패독

가.시험법 적용범위

수산물 중 패류, 갑각류에 적용한다.

나.분석원리

검체중의 도모익산(Domoic acid)을 50% 메탄올 용액으로 추출한 후 액체크로마토그래프로 측정한다.

다.장치

1)액체크로마토그래프 : 자외선흡광검출기(UV photometric detector)를 사용한다.

2)액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)를 사용한다.

라.시약 및 시액

1)아세토니트릴 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2)물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3)추출용액(50% 메탄올 용액) : 물 500 mL에 메탄올 500 mL를 가한다.

4)10% 아세토니트릴 용액 : 물 90 mL에 아세토니트릴 10 mL를 가한다.

5)0.1% 트리플루오로아세트산(Trifluoroacetic acid) 함유 용액 : 트리플루오로아세트산 1 mL를 정확히 취하여 물로 최종 1 L가 되게 한다.

6)0.1% 트리플루오로아세트산 함유 아세토니트릴 용액 : 트리플루오로아세트산 1 mL를 정확히 취하여 아세토니트릴로 최종 1 L가 되게 한다.

7)표준원액 : 도모익산 표준물질을 10% 아세토니트릴 용액에 녹여 10 µg/mL가 되게 한다. 조제한 표준원액은 갈색병에 담아 냉장 보관한다.

8)표준용액 : 표준원액을 10% 아세토니트릴 용액으로 희석하여 농도가 0.2～2.0 µg/mL의 범위가 되도록 하여 검량선 작성용 표준용액으로 하며, 이 용액은 갈색병에 담아 조제 후 즉시(당일) 사용한다.

마.시험용액의 조제

검체를 세척 및 탈수과정을 거친 후, 껍질을 제거한 가식부 약 100 g을 취하여 균질화하고, 균질화된 검체 10 g를 정밀하게 취하여 추출용액 40 mL을 가한 후 다시 2분간 균질화한다. 시료용액을 원심분리한 후 상등액을 0.2 µm 멤브레인 필터로 여과한 것을 시험용액으로 하며, 이 용액은 갈색병에 담아 조제 후 즉시(당일) 사용한다. 단, 시험용액의 농도가 높아 검량곡선의 농도범위를 벗어날 경우 농도 범위 내로 희석하여 사용한다.

바.시험조작

1)액체크로마토그래프의 측정조건

가)칼럼 : C18(150 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

나)가드칼럼 : C18(4.0 mm × 3.0 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

다)칼럼온도 : 35°C

라)이동상 : 0.1% 트리플루오로아세트산 함유 용액 : 0.1% 트리플루오로아세트산 함유 아세토니트릴 용액(85 : 15, v/v)

마)이동상 유량 : 1.0 mL/분

바)시료주입량 : 20 µL

사)검출파장 : UV 242 nm

2)검량선 작성

표준원액을10% 아세토니트릴 용액으로 희석하여 농도가 0.2~2.0 µg/mL의 범위가 되도록 하여 검량선을 작성한다.

3)표준품의 크로마토그램

그림 1. 도모익산 표준용액(4.8분)의 크로마토그램 및 UV 스펙트럼

4)정량한계 : 0.8 mg/kg

사.정성시험

크로마토그램상의 피크는 동일한 측정조건에서 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다.

아.정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

1)계산

도모익산의 함량(μg/g) =

C : 검량곡선에서 구한 도모익산의 농도(μg/mL)

V : 시험용액의 최종부피(mL)

W : 시료량(g)

D : 희석배수

자.확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 도모익산을 확인한다.

1)액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가)칼럼 : C18(100 mm × 2.0 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나)칼럼온도 : 35°C

다)이동상 : 0.1% 트리플루오로아세트산 함유 용액 : 0.1% 트리플루오로아세트산 함유 아세토니트릴 용액(85 : 15, v/v)

라)이동상 유량 : 0.2 mL/분

마)시료 주입량 : 5 µL

바)이온화 방법 : ESI(positive)

사)Capillary temperature : 300℃

아)Capillary voltage : 3,500 V

자)Collision energy : 38 eV

차)Scan mode : MS2scan (Precursor ion : m/z 312, Fragment ion : m/z 266, 248)

2)질량스펙트럼(예시)

그림 2. 도모익산 표준용액의 TIC(Total ion chromatogram) 및 질량스펙트럼