7.1.3.59 메소트리온(Mesotrione)

가. 시험법 적용범위곡류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세토니트릴로 추출한 후 실리카 컬럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 측정한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

라. 시약 및 시액

1) 용매 :잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 실리카(silica) : 컬럼크로마토그래피용 실리카(70～230 mesh)를 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

3) 표준원액:표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액:표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 기타시약:잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 추출 용기에 정밀히 달아 넣고 0.2 M 염화암모늄(NH 4Cl) 수용액(pH 2) 20 mL를 넣어 10분간 습윤화 하고 아세토니트릴 100 mL를 넣고 2분간 강하게 흔들어 추출한다. 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고 잔류물은 아세토니트릴 40 mL로 씻어 위의 여과액에 합한다. 합친 여과액을 40℃에서 감압 농축하고 건고물에 2% 인산이칼륨(K 2HPO4)용액 40 mL를 넣은 후 1 M의 염산으로 pH를 6±0.2로 맞춘다. pH 조절액을 250 mL 용량의 분액깔때기로 옮기고 50 mL 헥산을 넣어 분배 후 헥산층을 유출시켜 버린다. 수용액 층은 100 mL 용량의 비커에 받아서 6 M 염산과 1 M의 염산을 이용하여 pH를 2±0.2로 맞추고 여분의 분액깔때기로 옮긴다. 분액깔때기에 디클로로메탄 50 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들어 정치하여 층을 분리시킨다. 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수하고 다시 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 넣어 위와 같이 되풀이한 다음 위의 디클로로메탄과 합한다. 합친 용액을 40℃ 이하에서 감압 농축하여 날려버리고 건고물은 아세톤 10 mL에 녹인다.

2) 정제
안지름 1.1 cm, 길이 40 cm의 컬럼관에 실리카 5 g, 다음에 무수황산나트륨 약 2 g을 충전한 후 아세톤 25 mL를 넣어 상단에 소량의 아세톤이 남을 정도로 유출시켜 버린다. 여기에 위의 아세톤에 녹인 용액 10 mL를 넣은 후 약 3 mL/분의 유속으로 유출시켜버린다. 충전제 표면이 노출되기 직전 메탄올 : 아세톤(7 : 93) 혼합액 50 mL를 넣어 유출시켜 버리고, 메탄올 : 아세톤(20 : 80) 혼합액 50 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃ 이하에서 감압 농축하고 건고물은 아세토니트릴 : 50 mM 인산이수소칼륨(KH 2PO4)(30 : 70) 혼합액 10 mL로 녹여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼:C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 검출파장:258 nm

다) 컬럼 온도:40℃

라) 이동상:아세토니트릴과 50 mM 인산이수소칼륨(KH2PO4) 함유 물(30 : 70)의 혼합액, pH 2～5

마) 이동상유속 :1 mL/분

바) 주입량:50 μL

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.

메소트리온(11.9분)

4) 정량한계
0.01 mg/kg

5) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼:C18(2 mm × 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상:아세토니트릴, 물, 포름산(25 : 75 : 0.1)의 혼합액

다) 컬럼 온도:40℃

라) 이동상유속 :0.2 mL/분

마) 주입량:10 μL

바) 이온화:ESI negative-ion mode

사) 분자량 범위:100～400m/z

아) Capillary temperature:330℃

자) Tube lens offset:-31 V

차) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	이온 (m/z)
메소트리온 (Mesotrione)	12.0	339.3	338

사. 정성시험위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 분석조건에서도 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.