7.1.3.61 디비이디시(DBEDC)

가. 시험법 적용범위채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 메탄올 및 수산화나트륨 용액으로 추출한 후 흡인 여과하고 황산으로 pH를 맞춘 다음 감압 농축한다. 클로로포름으로 분배한 후 유기용매층을 탈수, 감압 농축하고 플로리실 컬럼크로마토그래피(메탄올 : 아세톤(50 : 50) 혼합액)로 정제하여 액체크로마토그래프로 측정한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-형광검출기(HPLC-FLD)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 플로리실(florisil) : 컬럼크로마토그래피용(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

4) 표준원액 : 표준품을 메탄올에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액 : 표준원액을 각각 메탄올 : 0.1% 포름산(60 : 40) 혼합액에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 25 g을 추출 용기에 달아 넣고 메탄올 100 mL와 10% 수산화나트륨 용액 5 mL를 넣고 3분간 강하게 흔들어 추출한다. Celite 545가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고 잔류물은 메탄올로 씻어 위의 여과액과 합한다. 여과액은 1 N 황산을 이용하여 pH를 7로 맞추고 40℃ 이하에서 감압 농축한 후 분액깔때기에 옮기고 메틸렌블루 40 mL를 첨가한 다음 클로로포름 50 mL를 넣고 흔들어 정치하여 층을 분리시킨다. 클로로포름층을 취한 후 다시 수용액층에 클로로포름 50 mL를 넣고 분배과정을 되풀이하여 추출된 용액을 합친다. 합친 용액을 40℃ 이하에서 감압 농축하고 건고물은 클로로포름 5 mL로 녹인다.

2) 정제
안지름 1.1 cm, 길이 40 cm의 컬럼관에 플로리실 5 g, 다음에 무수황산나트륨 약 2 g을 충전한 후 클로로포름 50 mL를 넣어 상단에 소량의 클로로포름이 남을 정도로 유출시켜 버린다. 여기에 위의 클로로포름에 녹인 용액을 가한 후 약 3 mL/분의 유속으로 유출시켜 버린다. 충전제 표면이 노출되기 직전 아세톤 : 클로로포름(50 : 50) 혼합액 100 mL를 넣어 유출시켜 버리고, 메탄올 : 아세톤(50 : 50) 혼합액 100 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃ 이하에서 감압 농축하여 건고물을 메탄올 3 mL에 녹인 다음 0.1% 포름산 2 mL를 넣어 잘 혼합하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼 : C18(4.6 mm × 250 mm, 5μm) 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼 온도 : 40℃

다) 이동상 : 메탄올과 0.1% 포름산 함유 물(60 : 40)의 혼합액

라) 이동상 유속 : 1 mL/분

마) 주입량 : 20 μL

바) 검출파장 : Ex 225 nm, Em 295 nm

2) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.

디비이디시(8.3분)

4) 정량한계
0.02 mg/kg

5) 액체크로마토그래프-질량분석의 분석조건

가) 컬럼 : C18(2.0 mm × 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼 온도 : 40℃

다) 이동상 : 메탄올 및 0.1% 포름산(60 : 40) 혼합액

라) 이동상유속: 0.2 mL/분

마) 주입량 : 5 μL

바) 이온화 : ESI negative-ion mode

사) 분자량 범위 : 100～500m/z

아) Capillary temperature : 350℃

자) Cone voltage : -100 V

차) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	이온 (m/z)
디비이디시 (DBEDC)	5.4	834.7	325

사. 정성시험위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 분석조건에서도 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 주. 액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간 및 질량 스펙트럼으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

아. 정량시험정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.