7.1.3.62 옥솔린산(Oxolinic acid)

가. 시험법 적용범위곡류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 1 N 염산 및 메탄올로 추출한 후 흡인 여과하고 감압 농축한다. 농축액에 수산화나트륨 용액을 이용해 pH를 맞춘 다음 헥산으로 세정하고 다시 염산으로 pH를 조절해 디클로로메탄으로 분배하여 액체크로마토그래프로 측정한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-형광검출기(HPLC-FLD)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 0.25 M 수산화나트륨 : 메탄올(10 : 90) 혼합액에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 각각 메탄올 : 0.1% 포름산(40 : 60) 혼합액에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료(곡류는 10 g, 채소류는 20 g)를 추출 용기에 달아넣고 1 N 염산 : 메탄올(10 : 90) 혼합액 100 mL를 첨가한 후 2분간 강하게 흔들어 추출한다. 여과액을 감압 농축한 후 2% 인산일수소칼륨(K 2HPO4) 40 mL를 넣은 후 5 N 및 1 N 수산화나트륨 용액을 이용하여 pH 7.5～8.0으로 맞춘 다음 250 mL 분액깔때기로 옮긴다. 분액깔때기에 헥산 50 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들어 정치하여 층을 분리시킨다. 헥산층은 버리고 수용액층을 여분의 분액깔때기로 옮긴 다음 6 N 및 1 N 염산을 이용하여 pH 2.5로 맞추고 디클로로메탄 50 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들어 정치하여 층을 분리시킨다. 디클로로메탄층을 취한 후 다시 수용액층에 디클로로메탄 50 mL를 넣고 분배과정을 되풀이 하여 추출된 용액을 합친다. 합친 용액을 40℃ 이하에서 감압 농축하고 메탄올 : 0.1% 포름산(40 : 60) 혼합액 5 mL로 녹여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼 : C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼 온도 : 40℃

다) 이동상 : 메탄올과 0.1% 포름산 함유 물(40 : 60)의 혼합액

라) 이동상 유속 : 1 mL/분

마) 주입량 : 20 μL

바) 검출기파장 : Ex 330 nm, Em 365 nm

2) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.

옥솔린산(8.3분)

4) 정량한계
0.02 mg/kg

5) 액체크로마토그래프-질량분석의 분석조건

가) 컬럼 : C18(2.0 mm × 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼 온도 : 40℃

다) 이동상 : 메탄올과 0.1% 포름산 함유 물(40 : 60)의 혼합액

라) 이동상 유속 : 0.2 mL/분

마) 주입량 : 5 μL

바) 이온화 : ESI positive-ion mode

사) 분자량 범위 : 100～400m/z

아) Capillary temperature : 350℃

자) Cone voltage : 80 V

차) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	이온 (m/z)
옥솔린산 (Oxolinic acid)	5.4	261.2	262

사. 정성시험위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 분석조건에서도 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 주. 액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간 및 질량 스펙트럼으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

아. 정량시험정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.