7.1.3.64 퀸메락(Quinmerac)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세톤으로 추출한 후 디클로르메탄과 헥산을 이용하여 액-액 분배하고 벤젠, 디메틸설폭사이드, 요오드화메틸, 수소화나트륨으로 메틸화하여 실리카 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 아세톤에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액 1 mL를 취하여 플라스크에 넣고 실온에서 질소 가스를사용하여증발건고 시킨 후 메틸화에 따라 실험하고 아세토니트릴로 적절한 농도로 혼합,희석해 사용한다.

5) 실리카 카트리지(silica cartridge) : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 1 N 염산 수용액 1 mL를 가한 후 5분간 방치하여 산성화 시킨 후 아세톤 100 mL를 넣어 10분간 흔들어 섞어 추출한다. 추출액을 부흐너 깔때기로 흡인 여 과한 후, 아세톤 20 mL로 용기 및 잔류물을 씻어 앞의 여과액과 합하여 40℃ 이하에서 감압 농축한다. 농축 추출액을 250 mL 분액깔때기에 옮기고, 5% 염화나트륨 수용액 80 mL 및 디클로로메탄 70 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들어 섞은 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치 하여 분리된 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 과정을 1회 반복하여 앞서 받은 디클로로메탄층을 합한 후 40℃ 이하에서 감압 농축한다.

2)메틸화농축 건고물을 벤젠 4 mL를 넣어 녹여, 이 중 2 mL를 감압플라스크에 취한 후 디메틸설폭
사이드(DMSO) 2 mL, 요오드화메틸 2 mL 및 수소화나트륨 0.2 g을 넣어 테프론 테이프로 실링하여 막은 후 40℃에서 30분간 메틸화시킨 후 물 10 mL를 서서히 넣으면서 반응을 종료시킨다. 메틸화에 의해 얻어진 용액을 분액깔때기에 옮기고, 5% 염화나트륨 수용액 30 mL 및 헥산 25 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들어 섞은 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 분리된 헥산층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 과정을 1회 반복하여 앞서 받은 헥산층과 합한 후 40℃ 이하에서 감압 농축 한 후 건고물을 헥산 2 mL에 녹인다.

3) 정제
헥산 5 mL를 통과시켜 활성화시킨 실리카 카트리지에 상기 재용액 전량을 넣고, 헥산 8 mL 및 헥산 : 아세톤(90 : 10) 혼합액 5 mL를 차례로 유출시켜 버리고, 헥산 :아세톤(90 : 10) 혼합액 5 mL로 용출 하여받은후 40℃ 이하에서 감압 농축하여, 건고물을 50% 아세토니트릴 2 mL로 녹여 시험용액으로 사용한다.

바. 시험조작

1)액체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼 : C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 : 아세토니트릴과 물(50:50)의 혼합액

다) 이동상 유속 : 1 mL/분

라) 컬럼 온도 : 40℃

마) 검출파장 : 240 nm

바) 주입량 : 20 μL

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.

퀸메락(7.9분)

4) 정량한계
0.02 mg/kg

사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 퀸메락을 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기의 분석조건

가) 컬럼 : C18(2.1 mm × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 :0.1% 포름산 함유 아세토니트릴과 0.1% 포름산 함유 수용액(20:80)의 혼합액

다) 이동상 유속 : 0.2 mL/분

라) 컬럼 온도 : 40℃

마) 주입량 : 5 μL

바) 이온화 : ESI positive-ion mode

사)액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
퀸메락 (Quinmerac)	4.6	221.6	221.9	141, 149