7.1.3.68 디펜조쾃(Difenzoquat)

가. 시험법 적용범위곡류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 2 N 염산 용액과 아세토니트릴로 추출한 후 헥산 및 디클로로메탄 : 아세톤(50 : 50) 혼합액으로 액-액 분배하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품(Difenzoquat methyl sulfate)을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴로 희석하여 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0 mg/L가 되도록 하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다.

5) 2% 인산수소이나트륨(disodium hydrogen phosphate) 용액 : 인산수소이나트륨 2 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

6) 0.01 M 1-헥산설폰산나트륨염수화물(1-hexanesulfonic acid, sodium salt hydrate) 용액 : 1-헥산설폰산나트륨염수화물 1.88 g을 물 990 mL에 녹여 0.1 M 인산을 넣어 pH 3으로 맞춘 다음 물을 넣어 1,000 mL가 되게 한다.

7) 0.005 M 암모늄아세테이트(ammonium acetate) 용액 : 암모늄아세테이트 0.39 g을 물에 녹여 1,000 mL가 되게 한다.

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 25 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고, 2 N 염산 용액 40 mL를 넣은 후 아세토니 트릴 100 mL를 넣고 2분간 강하게 흔들어 섞어 추출한다. 부흐너깔때기로 흡인 여과하고 잔류물을 아세토니트릴 40 mL로 씻어 상기 여과액과 합하여 약 40 mL가 남을 정도까지 감압 농축한 후 2% 인산수소이나트륨 용액 40 mL를 넣고 1 N 수산화나트륨 용액을 넣어 pH 6으로 맞춘다. 이를 분액깔때기에 옮겨 헥산 50 mL를 넣고 강하게 흔들어 30분간 정치하여 층을 분리시키고 물층을 별도의 분액깔때기로 옮기고, 분액깔때기에 다시 헥산 50 mL를 넣고 강하게 흔들고 30분간 정치하여 층을 분리시킨다. 별도의 분액깔때기에 상기 물층과 디클로로메탄 : 아세톤(50 : 50) 혼합액 50 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들고 30분간 정치하여 층을 분리시킨다. 디클로로메탄 : 아세톤(50 : 50) 혼합액층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수한 후 감압농축플라스크에 받는다. 물층에 다시 디클로로메탄 : 아세톤(50 : 50) 혼합액 50 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들고 30분간 정치하여 층을 분리시킨 후 디클로로메탄 : 아세톤(50 : 50) 혼합액층을 탈수하여 앞의 감압농축플라스크에 합한다. 40℃ 이하에서 감압 농축하고 잔류물을 아세토니트릴 3 mL를 넣어 녹인 다음 0.01 M 1-헥산설폰산나트륨염수화물 용액 7 mL로 녹여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼 : C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 : 0.01 M 1-헥산설폰산나트륨염(1-hexane sulfonic acid, sodium salt) 용액 및 아세토니트릴(65 : 35) 혼합액

다) 이동상 유속 : 1 mL/분

라) 컬럼 온도 : 40℃

마) 검출파장 : 256 nm

바) 주입량 : 20 μL

2) 검량선 작성
표준용액 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0 mg/L를 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.

디펜조쾃(10.9분)

4) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 디펜조쾃을 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기의 분석조건

가) 컬럼 : C18(2.0 mm × 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 : 0.005 M 암모늄아세테이트 함유 물과 아세토니트릴(80 : 20)의 혼합액

다) 이동상 유속 : 0.5 mL/분

라) 컬럼 온도 : 40℃

마) 캐필러리 온도 : 350℃

바) 이온화 : ESI positive-ion mode

사) Cone voltage : 142 V

아) 주입량 : 5 μL

자) 분자량 범위 : 100～300m/z

차) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	이온 (m/z)
디펜조쾃 (Difenzoquat)	9.8	249.3	249