7.1.3.69 아시플루오르펜(Acifluorfen)

가. 시험법 적용범위두류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세토니트릴로 추출하고 다시 디클로로메탄으로 액-액 분배하여 14% 삼불화붕소 메탄올 용액으로 메틸화한 후 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 아세톤으로 희석하여 10 mg/L가 되게 한 후 이 용액 0.05, 0.1, 0.2, 0.4, 0.8, 1.0 mL를 마개 달린 시험관에 취하여 질소가스
를 사용하여 농축한다. 이 잔류물을 마. 시험용액의 조제 2) 메틸화 과정에 따라 실험하여 최종농도가 0.05, 0.1, 0.2, 0.4, 0.8, 1.0 mg/L가 되도록 하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다.

5) 0.2 M 염화암모늄(ammonium chloride) 용액 : 염화암모늄 1.07 g을 물 90 mL에 녹인 후 인산을 넣어 pH 2로 맞춘 다음 물을 넣어 100 mL가 되게 한다.

6) 2% 인산수소이나트륨(disodium hydrogen phosphate) 용액 : 인산수소이나트륨 2 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

7) 메틸화 용액 : 14% 삼불화붕소(boron trifluoride) 메탄올 용액을 사용한다.

8)5% 황산나트륨(sodium sulfate) 용액 : 황산나트륨 5 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

9) 플로리실(Florisil) : 컬럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh) 5 g을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 25 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고, 0.2 M 염화암모늄 용액 20 mL를 넣은 후 10분간 방치한다. 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 3분간 강하게 흔들어 추출한다. 이를 부흐너깔때기로 흡인 여과하고, 아세토니트릴 40 mL로 잔류물 및 용기를 씻어 여과액과 합한다. 이 액을 500 mL 용량의 감압농축플라스크에 옮기고 40℃ 이하에서 감압 농축한 후 잔류물에 2% 인산수소이나트륨 용액 40 mL와 헥산 50 mL를 넣어 녹인 후 분액깔때기로 옮긴다. 분액깔때기를 흔들어 섞은 후 30분간 정치하여 층을 분리시킨 다음 물층을 취하여 2 N 염산 용액을 넣어 pH 2로 맞춘다. 물층에 디클로로메탄 50 mL를 넣고 강하게 흔들고 30분간 정치하여 층을 분리시킨 다음 디클로로메탄층을 감압농축플라스크에 취한다. 물층에 다시 디클로로메탄 50 mL를 넣고 강하게 흔들고 30분간 정치하여 층을 분리시킨 후 디클로로메탄층을 상기 감압농축플라스크에 합한 후 40℃ 이하에서 약 2 mL가 남도록 감압 농축한다. 잔류물을 마개 달린 시험관에 옮긴 후 아세톤 10 mL로 농축플라스크를 세척하여 합한 다음 40℃ 이하에서 질소가스를 사용하여 완전히 농축한다.

2) 메틸화
위의 마개 달린 시험관에 메탄올 1 mL를 넣어 잔류물을 녹인 후 14% 삼불화붕소 메탄올 용액 1 mL를 넣은 다음 마개를 닫고 80℃ 수욕상에서 20분간 반응시킨다. 여기에 5% 황산나트륨 용액 10 mL를 넣어 반응을 끝내고 분액깔때기로 옮긴 후 벤젠 : 헥산(40 : 60) 혼합액 10 mL를 넣고 강하게 흔들고 30분간 정치하여 층을 분리시킨 후 상층인 벤젠 : 헥산(40 : 60) 혼합액 층을 취한다.

3) 정제
안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리컬럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨 2 g을 차례로 충전한 후 헥산 25 mL를 넣고 무수황산나트륨 상단에 소량의 헥산이 남을 정도까지 유출시킨다. 이 컬럼에 상기 벤젠 : 헥산(40 : 60) 혼합액 10 mL를 넣고 유출시킨다. 무수황산나트륨 상단이 노출되기 직전에 에틸아세테이트 : 헥산(10 : 90) 혼합액 50 mL로 용출시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 용출액을 40℃ 이하에서 감압 농축한 후 잔류물을 벤젠 : 헥산(40 : 60) 혼합액 10 mL로 녹여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼 : DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유속 : 질소(N2), 1 mL/분

다) 주입부 온도 : 260℃

라) 오븐 온도 : 210℃

마) 검출기 온도 : 280℃

바) 주입모드 : Split mode(10 : 1)

사) 주입량 : 1 μL

2) 검량선 작성
표준용액 0.05, 0.1, 0.2, 0.4, 0.8, 1.0 mg/L를 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.

아시플루오르펜 메틸 에스터(12.6분)

4) 정량한계
0.02 mg/kg

사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 아시플루오르펜을 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 분석조건

가) 컬럼 : DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유속 : 헬륨(He), 1 mL/분

다) 주입부 온도 : 250℃

라) 오븐 온도 : 150℃에서 시험용액을 주입한 후 3분간 유지하고 15℃/분의 비율로 210℃까지 온도를 상승시켜 10분간 유지한다.

마) 인터페이스 온도 : 280℃

바) 이온원 온도 : 230℃

사) 사중극자(quadrupole) 온도 : 150℃

아) 주입모드 : Splitless mode

자) 주입량 : 1 μL

차) 분자량 범위 : 100～400m/z

카) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	이온 (m/z)
아시플루오르펜 (Acifluorfen)	13.9	375.7	375, 223, 344

(주. 분자량은 아시플루오르펜이 메틸화 된 아시플루오르펜 메틸 에스터의 분자량임)