7.1.3.72 스피로테트라맷(Spirotetramat)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 포름산을 이용하여 pH 3～5의 산성으로 조절한 아세토니트릴로 추출한 후 다시 디클로로메탄으로 액-액 분배하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 스피로테트라맷(Spirotetramat) 및 스피로테트라맷-엔올(Spirotetramat-enol) 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고 포름산을 이용하여 pH 3～5의 산성으로 조절한 아세토니트릴 50 mL를 넣은 후 5분간 강하게 흔들어 추출한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고, 아세토니트릴 20 mL로 잔류물 및 용기를 씻어내어 앞의 여과액과 합한 후 분액깔때기로 옮긴다. 여기에 물 150 mL와 포화염화나트륨용액 30 mL를 넣은 다음 디클로로메탄 100 mL를 넣고 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨 후 디클로로메탄층을 취하고 물층에 다시 디클로로메탄 50 mL를 넣은 다음 위와 같이 되풀이하여 디클로메탄층을 합한다. 디클로로메탄은 무수황산나트륨을 이용하여 탈수, 여과하고 40℃ 이하에서 감압하여 용매를 모두 날려버린 다음 잔류물을 0.1% 포름산 함유 물 : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴(45 : 55) 혼합액으로 녹여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프-질량분석기의 분석조건

가) 컬럼 : C18(2.0 mm × 150 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 물

(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴

(3) 농도구배조건

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	100	0
3.0	100	0
3.5	70	30
4.0	45	55
15.0	45	55

다) 이동상 유속 : 0.2 mL/분

라) 컬럼 온도 : 40℃

마) 주입량 : 5 μL

바) 이온화 : ESI positive-ion mode

사) Cone voltage : 10〜30 V

아) Collision energy : 10〜40 eV

자) 분자량 범위 : 100〜500m/z

차) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	선구이온 (Precursor ion,m/z)	생성이온 (Product ion,m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
스피로테트라맷 (Spirotetramat)	8.4	374	302	17
			330	17
스피로테트라맷-엔올 (Spirotetramat-enol)	6.4	302	216	27
			270	25

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 302(스피로테트라맷(Spirotetramat)), 216(스피로테트라맷-엔올(Spirotetramat-enol)) m/z이온의 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.

A-1 :스피로테트라맷(8.4분) 374>302, A-2 :스피로테트라맷(8.4분) 374>330,

B-1 :스피로테트라맷-엔올(6.4분) 302>216, B-2 :스피로테트라맷-엔올(6.4분) 302>270

4) 정량한계
0.02 mg/kg

사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 스피로테트라맷(Spirotetramat) 및 스피로테트라맷-엔올(Spirotetramat-enol)을 확인한다.