7.1.3.73 디디티(DDT)
가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.
나. 분석원리시료를 아세톤으로 추출한 후 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.
다. 장치
1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)
2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)
라. 시약 및 시액
1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급
2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것
3) 표준원액 : 디디티(p,p'-DDT, o,p'-DDT, p,p'-DDE, p,p'-TDE(DDD)) 표준품을 각각 헥산에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.
4) 표준용액 : 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.
5) 플로리실(Florisil) : 컬럼크로마토그래피용 플로리실(60~100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.
6) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급
마. 시험용액의 조제
1) 추출
시료 25 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류 등 건조 시료는 물 20 mL를 넣고 30분간 방치) 아세톤 100 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들어 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고, 잔류물을 아세톤 40 mL로 씻어 내려 앞의 여과액과 합친다. 합친 여과액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화염화나트륨용액 50 mL, 물 450 mL 및 헥산 100 mL를 넣어 1분 이상 강하게 흔들고 정치하여 층을 분리시킨 후, 헥산층을 20 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 탈수하고 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하고, 잔류물을 헥산 10 mL로 녹인다. ※ 지방성 시료의 경우 상기 잔류물을 헥산 20 mL에 녹여 125 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 40 mL로 2회 분배 추출하여 아세토니트릴층을 40℃ 이하에서 감압 농축하고 헥산 10 mL로 녹인다.
2) 정제
안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리컬럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이 차례로 건식 충전한 후 헥산 100 mL를 넣어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 10 mL를 고정상 상단에 넣어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄 : 아세토니트릴 : 헥산(50 : 0.3 : 49.7) 혼합액 150 mL를 넣어 용출하여 감압농축플라스크에 취한다. 이 용출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압 농축한 후 잔류물을 헥산 10 mL로 녹인다.
바. 시험조작
1) 기체크로마토그래프의 분석조건
가) 컬럼 : DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것
나) 이동상가스 및 유속 : 질소(N2), 1 mL/분
다) 주입부 온도 : 260℃
라) 오븐 온도 : 80℃에서 220℃까지 10℃/분 비율로 온도를 상승시켜 3분간 유지한 후, 240℃까지 3℃/분의 비율로 온도를 상승, 280℃까지 20℃/분의 비율로 온도를 상승시켜 15분간 유지한다.
마) 검출기 온도 : 320℃
바) 주입모드 : Split mode(20 : 1)
사) 주입량 : 1 μL
2) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.
3) 표준품의 크로마토그램
그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.
p,p'-디디이(18.6분), p,p'-디디디(20.2분), o,p'-디디티(20.4분), p,p'-디디티(21.9분)
4) 정량한계
0.01 mg/kg
사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.
아. 확인시험기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 p,p'-디디이, p,p'-디디디, o,p'-디디티, p,p'-디디티를 확인한다.
1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 분석조건
가) 컬럼 : DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것
나) 이동상가스 및 유속 : 헬륨(He), 0.9 mL/분
다) 주입부 온도 : 260℃
라) 오븐 온도 : 80℃에서 220℃까지 10℃/분 비율로 온도를 상승시켜 3분간 유지한 후, 240℃까지 3℃/분의 비율로 온도를 상승, 280℃까지 20℃/분의 비율로 온도를 상승시켜 15분간 유지한다.
마) 인터페이스 온도 : 300℃
바) 주입모드 : Splitless mode
사) 주입량 : 1 μL
아) 분자량 범위 : 50~500m/z
자) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온
분석성분 (Compound) |
머무름 시간 (분) |
분자량 (MW) |
이온 (m/z) |
p,p'-디디이 (p,p'-DDE) |
18.6 |
318.0 |
318, 246 |
p,p'-디디디 (p,p'-TDE(DDD)) |
20.2 |
320.0 |
237, 235, 165 |
o,p'-디디티 (o,p'-DDT) |
20.4 |
354.5 |
237, 235, 165 |
p,p'-디디티 (p,p'-DDT) |
21.9 |
354.5 |
237, 235, 165 |