7.1.3.78 인다지플람(Indaziflam)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를아세토니트릴로 추출한 후 실리카 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-질소 · 인 검출기(GC-NPD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 각각 아세톤에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세톤에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 실리카 카트리지(silica cartridge) : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) C18카트리지 : C18(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

7) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고 (곡류 및 두류 등 건조 시료의 경우 물 40 mL를 가한 후 30분간 방치) 아세토니트릴 50 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물을 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고 아세토니트릴 20 mL로 잔류물 및 용기를 씻어내려 앞의 여과액과 합한다. 합친 여과액을 40℃ 이하에서 감압 하여 용매를 모두 날려버린 후 물 100 mL 를넣는다. 이를 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화염화나트륨용액 30 mL와 디클로로메탄 50 mL를 가한 후 강하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 50 mL를 추가로 넣어 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압하여 용매를 모두 날려버린 후, 잔류물에 헥산을 넣어 최종부피가 10 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다. ※ 지방성 시료의 경우 잔류물에 헥산 30 mL를 건고물에 넣어 녹인 후 250 mL 분량의 분액깔때기에 옮기고 아세토니트릴 30 mL로 2회 분배 추출한다. 합친 아세토니트릴층을 40℃에서 감압 농축한 후 잔류물에 헥산을 넣어 최종부피 10 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터를 이용해 여과한 후 시험용액으로 한다.

2) 정제
(* 채소류의 경우 실리카 카트리지 정제 후 다음 과정을 추가한다. C 18카트리지에 디클로로메탄 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린 후 고정상 상단이 노출되기 전에 건고물을 녹인 5 mL의 디클로로메탄 용액을 넣는다. 이어 디클로로메탄 5 mL를 넣어 버린 후 메탄올 : 디클로로메탄(2 : 98) 혼합액 10 mL를 넣어 용출하여 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압하여 용매를 모두 날려버리고 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 잔류물에 아세톤을 넣어 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.)

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼 : DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유속 : 질소(N2), 1 mL/분

다) 오븐 온도 : 220℃에서시험용액을주입하고 5분간 유지 후 20℃/분의 비율로 온도를 280℃까지 상승시켜 5분간 유지 후 5℃/분의 비율로 온도를 300℃까지 상승시켜 3분간 유지한다.

라) 주입부 온도 : 260℃

마) 검출기 온도 : 280℃

바) 주입량 : 1 μL, splitless

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.

인다지플람(8.9분)

4) 정량한계
0.02 mg/kg

사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 인다지플람을 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 분석조건

가) 컬럼 : DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유속 : 헬륨(He), 1 mL/분

다) 오븐 온도 : 220℃에서시험용액을주입하고 5분간 유지 후 20℃/분의 비율로 온도를 280℃까지 상승시켜 5분간 유지 후 5℃/분의 비율로 온도를 300℃까지 상승시켜 3분간 유지한다.

라) 주입부 : 260℃

마) 인터페이스 온도 : 280℃

바) 분자량 범위 : 50～450m/z

사) 주입량 : 1 μL, splitless

아)기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
인다지플람 (Indaziflam)	7.8	301.4	301.0	144, 286