7.1.3.79 아이속사플루톨(Isoxaflutole)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를0.1% 아세트산 함유 물 : 아세토니트릴(20 : 80) 혼합액으로 추출하고 디클로로메탄으로 액-액 분배한 후, 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 아이속사플루톨 및 아이속사플루톨 디케토니트릴 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고 (곡류 및 두류 등 건조 시료의 경우 0.1% 아세트산 수용액 20 mL를 가한 후 30분간 방치) 0.1% 아세트산 함유 물 : 아세토니트릴(20 : 80) 혼합액 50 mL를 넣고 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물을 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고 아세토니트릴 20 mL로 잔류물 및 용기를 씻어내려 앞의 여과액과 합한다. 합친 여과액에 물 100 mL를 넣고 pH 미터기를 이용해 1 N HCl를 천천히 가해 pH 2가 되도록 한다. 이를 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 염화나트륨 15 g 및 디클로로메탄 50 mL를 차례로 넣은 후 강하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 추가로 넣어 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압하여 용매를 모두 날려버린 후, 잔류물에 아세토니트릴을 넣어 최종부피 5 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다. ※ 지방성 시료의 경우 잔류물에 헥산 30 mL를 건고물에 넣어 녹인 후 250 mL 분량의 분액깔때기에 옮기고 아세토니트릴 30 mL로 2회 분배 추출한다. 합친 아세토니트릴층을 40℃에서 감압 농축한 후 잔류물에 아세토니트릴을 넣어 최종부피 5 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터를 이용해 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼 : C18(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼 온도 : 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 메탄올

(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 물

(3) 농도구배조건

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	10	90
4.0	10	90
9.0	90	10
10.0	90	10
12.0	10	90
16.0	10	90

라) 이동상 유속 : 0.2 mL/분

마) 주입량 : 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 : ESI positive-ion mode

나) Capillary temperature : 350℃

다) Spray voltage : 4.5 kV

라) Collision gas : 아르곤(Ar)

마)기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	선구이온 (Precursor ion,m/z)	생성이온(Product ion,m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
아이속사플루톨 (Isoxaflutole)	360	220	30
		251	20
아이속사플루톨 디케토니트릴 (Isoxaflutole diketo-nitrile)	360	69	10
		251	20

3) 검량선 작성
표준용액을 아세토니트릴에 일정 농도로 희석한 다음 시료에 주입하고 시험용액의 조제과정에 따라 시험한 후, 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 이온의 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선(matrix matched calibration curve)을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프- 질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.

A : 아이속사플루톨(9.4분), B : 아이속사플루톨 디케토니트릴(8.8 분)

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정량시험위 조건으로 얻은 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.