7.1.3.81 벤조빈디플루피르(Benzovindiflupyr)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세토니트릴로 추출하여 실리카 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) 실리카 카트리지(silica cartridge) : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고( 곡류 및 두류의 경우 물 20 mL를 가한 후 30분간 방치 )아세토니트릴 50 mL를 넣어 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 이를 여과보조제(Celite 545) 10 g이 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과한 후 아세토니트릴 20 mL로 잔류물 및 용기를 씻어내려 앞의 여과액과 합친 뒤 40℃ 이하에서 감압 농축한다. 잔류물에 물 100 mL를 넣어 녹인 후 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화염화나트륨용액 20 mL를 더한 뒤 디클로로메탄 50 mL를 차례로 넣고 강하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨다. 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 추가로 넣어 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린 후, 헥산 : 아세톤(90 : 10) 혼합액 10 mL를 넣어 녹인다. ※ 지방성 시료의 경우 미리 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 30 mL를 잔류물에 넣어 녹인 후 250 mL 분량의 분액깔때기에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL로 2회 분배하여 추출한다. 합친 아세토니트릴층을 40℃에서 감압 농축한 후 잔류물에 헥산 : 아세톤(90 : 10) 혼합액 10 mL를 넣어 녹인다.

2) 정제
실리카 카트리지에 헥산 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 추출액 중 5 mL를 카트리지에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산 : 아세톤(90 : 10) 혼합액 10 mL를 넣어 유출시켜 버리고 헥산 : 아세톤(80 : 20) 혼합액 15 mL로 용출하여 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축 후 잔류물에 아세토니트릴을 넣어 최종부피 5 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼 : C18(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼 온도 : 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴

(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 물

(3) 농도구배조건

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	20	80
1.0	20	80
6.0	80	20
8.0	80	20
10.0	20	80
13.0	20	80

라) 이동상 유속 : 0.2 mL/분

마) 주입량 : 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode

나) Capillary voltage : 0.91 kV

다) Collision gas : 아르곤(Ar)

라) Cone voltage : 54 V

마) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온(Precursor ion,m/z)	생성이온 (Product ion,m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
벤조빈디플루피르 (Benzovindiflupyr)	398.2	397.0	398	3421)	18
				378	14

1)정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.

벤조빈디플루피르(7.1분)

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 벤조빈디플루피르를 확인한다.