7.1.3.82 페녹사설폰(Fenoxasulfone)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세톤으로 추출하여 아미노프로필 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) 아미노프로필 카트리지(amino-propyl cartridge) : 아미노프로필(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 50 mL를 가한 후 30분간 방치) 아세톤 150 mL 를넣어 5분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물은 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과한 뒤 아세톤 30 mL로 잔류물 및 용기를 씻어내려 앞의 여과액과 합친다. 이를 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 물 150 mL, 포화염화나트륨용액 50 mL를 더한 뒤 디클로로메탄 50 mL를 차례로 넣고 강하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 추가로 넣어 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린 후, 헥산 5 mL 를넣어 녹인다. ※ 지방성 시료의 경우 미리 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 50 mL를 잔류물에 넣어 녹인 후 250 mL 분량의 분액깔때기에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 50 mL로 2회 분배하여 추출한다. 합친 아세토니트릴층을 40℃에서 감압 농축한 후 잔류물을 헥산 5 mL를 넣어 녹인다.

2) 정제
아미노프로필 카트리지에 헥산 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 추출액 5 mL를 카트리지에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 버리고 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤 : 헥산(2.5 : 97.5) 혼합액 10 mL를 넣고 유출시켜 버린다. 그 다음 아세톤 : 헥산(10 : 90) 혼합액 10 mL를 넣고 용출하여 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축 후 잔류물에 아세토니트릴을 넣어 최종부피 1 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터(nylon, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼 : C18계역상계 컬럼 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼 온도 : 40℃

다) 이동상 : 아세토니트릴과 물(63 : 37)의 혼합액

라) 이동상 유속 : 1.0 mL/분

마) 주입량 : 20 μL

바) 검출파장 : 240 nm

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.

페녹사설폰(6.7분)

* 컬럼 : XBridgeⓇC18(4.6 mm I.D.× 250 mm L., 5.0 μm)

4) 정량한계
0.03 mg/kg

사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 페녹사설폰을 확인한다.

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼：C18계역상 컬럼또는 이와 동등한 것

나) 컬럼 온도：40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 아세토니트릴

(2) 이동상 B : 10 mM 포름산암모늄 및 0.1% 포름산 함유 물

(3) 농도구배조건

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	20	80
1.0	20	80
4.0	80	20
8.0	80	20
10.0	20	80
12.0	20	80

라) 이동상 유속 : 0.2 mL/분

마) 주입량 : 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법：ESI positive-ion mode

나) Capillary voltage : 4.0 kV

다)Collision gas :아르곤(Ar)

다)Cone voltage : 30 V

라) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한특성이온

분석성분 (Compound)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion,m/z)	생성이온(Product ion,m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
페녹사설폰 (Fenoxasulfone)	366.3	365.0	383	2031)	14
				175	34
				366	8

1)정량이온