7.1.3.86 아세토클로르(Acetochlor)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 1% 아세트산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 아세토클로르, EMA 및 HEMA 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE : 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), 흑연화탄소(GCB, Graphitized Carbon Black), C 18(octadecy bonded silica), 1차 2차 아민(PSA, Primary Secondary Amine)

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣는다( 곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 5 mL를 넣고 30분간 방치). 여기에 아세토니트릴 10 mL를 넣은 뒤 5분간 강하게 흔든 후, 무수황산마그네슘 6 g, 아세트산나트륨 1.5 g을 넣어 5분간 강하게 흔들고, 4℃, 4,500 G에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 1,200 mg과 흑연화탄소 45 mg, 1차 2차 아민 400 mg, C 18400 mg이 미리 담겨져 있는 15 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 아세토니트릴층 전량을 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼 : C18계 역상 컬럼 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼 온도 : 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴

(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 물

(3) 농도구배조건

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	0	100
3.0	0	100
3.1	50	50
4.5	50	50
4.6	80	20
6.5	80	20
8.0	0	100
10.0	0	100

라) 이동상 유속 : 0.3 mL/분

마) 주입량 : 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode

나) Capillary voltage : 1.7 kV

다) Collision gas : 아르곤(Ar)

라) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion,m/z)	생성이온(Product ion,m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
아세토클로르 (Acetochlor)	269.8	269.1	270.1	2241)	12
				148	22
				133	33
이엠에이 (EMA)	135.2	135.1	136.1	911)	24
				117	23
에이치이엠에이 (HEMA)	151.2	151.0	152.1	1191)	24
				134	14
				91	35

1)정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.
A : 아세토클로르(6.1분), B :이엠에이(5.2분), C :에이치이엠에이(4.5분)
* 분석기기 : LC(ShimadzuⓇNexera X2), MS/MS(ShimadzuⓇLCMS-8060), 컬럼(XBridgeⓇC18,2.1 mm I.D. × 100 mm L., 3.5 μm)

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 모화합물 아세토클로르 및 대사산물 EMA, HEMA를 확인한다.