7.1.3.88 트리데모르프(Tridemorph)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세토니트릴로 추출한 후 아미노 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) 아미노프로필 카트리지(amino-propyl cartridge) : 아미노프로필(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고( 곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 40 mL를 넣고 30분간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물은 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과한 뒤 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 염화나트륨 10 g을 넣고 강하게 흔든다. 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 아세토니트릴층을 무수황산나트륨에 통과시켜 100 mL 메스플라스크에 받고, 아세토니트릴을 이용하여 100 mL로 정용한 후, 20 mL를 농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린 후, 메탄올 : 디클로로메탄(1 : 99) 혼합액 5 mL로 녹인다.

2) 정제
아미노 카트리지에 디클로로메탄 5 mL를 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 추출액 5 mL를 카트리지에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출하여감압농축플라스크에 받으며, 고정상 상단이 노출되기 전에 메탄올 : 디클로로메탄(1 : 99) 혼합액 7 mL를 추가로 용출하여합한다. 합친 용출액을 40℃ 이하에서 감압농축 후 잔류물에 아세토니트릴을 넣어 최종부피 5 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터(Nylon, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼 : C18계 역상 컬럼 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼 온도 : 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴

(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 물

(3) 농도구배조건

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	30	70
3.0	30	70
4.0	70	30
6.0	70	30
10.0	30	70

라) 이동상 유속 : 0.2 mL/분

마) 주입량 : 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode

나) Capillary voltage : 1.0 kV

다) Collision gas : 아르곤(Ar)

라) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion,m/z)	생성이온(Product ion,m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
트리데모르프 (Tridemorph)	297.5	297.3	298	1301)	26
				98	29

1)정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.트리데모르프(5.5분)
* 분석기기 : LC(WatersⓇAcquity UPLC), MS/MS(WatersⓇUS/Quattro premier XE),컬럼(XBridgeⓇC18,2.1 mm I.D. × 100 mm L., 3.5 μm)

5) 정량한계
0.01mg/kg

사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 트리데모르프를 확인한다.