2.2.2.9 비타민B6(피리독신)

가. 액체크로마토그래프에 의한 정량

1) 장치

액체크로마토그래프 : 형광검출기를 사용한다.

2) 시약 및 시액

가) 50 mM NaH2PO4：NaH2PO46.0 g을 증류수에 녹이고 염산으로 pH 2.5로 조절한 후 전량을 1 L로 한다.

나) 표준용액의 조제

비타민B6(피리독신염산염)을 증류수에 녹여 표준원액(100 μg/mL)을 조제하고, 표준원액을 증류수로 적당히 희석하여 표준용액을 만든다.

3) 시험용액의 조제

검체 0.5 ∼ 1.5 g을 취하여 잘게 부순 후, 증류수 25 mL를 가하여 30분 동안 초음파로 추출하고, 3,000 × g 원심분리하여 상등액을 여과한다. 잔류물에 증류수 25 mL를 다시 가하여 30분 동안 초음파로 추출하고, 원심분리하여 상등액을 여과하여 앞의 여액과 합하여 50 mL로 맞춘다. 이액을 0.45 μm 막 여과지(membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

4) 시험방법

가) 액체크로마토그래프의 조건

(1) 칼럼：역상칼럼(C18 또는 이와 동등한 것)

(2) 이동상：50 mM NaH2PO4(pH 2.5)

(3) 유속：1.0 mL/분

(4) 검출기：형광검출기(여기파장：290 nm, 측정파장：396 nm)

5) 정량시험

시험용액 및 표준용액을 각각 10 μL씩 주입하여 앞의 조건에서 시험한다. 표준용액의 피크의 넓이 또는 높이에 의해 구한 검량선을 사용하여 시험용액의 비타민B6(피리독신)의농도(μg/mL)를 구하고, 다음의 식에 의하여 검체중 비타민B6의 함량(mg/100 g)을 구한다.

가) 계산방법

비타민B6(피리독신, mg/100 g)	=	S	×	a×b	×	100
				검체량(g)		1,000

S：시험용액중의 비타민B6(피리독신)의 농도(μg/mL)

a：시험용액의 전량(mL)

b：시험용액의 희석배수