3.3.1 부틸히드록시아니졸(BHA), 디부틸히드록시톨루엔(BHT)

가. 기체가스크로마토그래프에 의한 정성 및 정량

1) 분석원리

식품 중의 BHA 및 BHT를 펜탄(pentane)으로 추출하고, 용매추출 및 플로리실 카트리지(Florisil cartridge) 등을 통하여 정제한 다음, 기체크로마토그래프로 정성 및 정량분석하는 방법이다.

2) 장치

가) 기체크로마토그래프 : 불꽃이온화검출기(Flame Ionization Detector, FID)를 사용한다.

(1) 수소염이온화 검출기(FID)

(2) 칼럼 : 길이 2 m, 안지름 3～4 ㎜, 스텐인레스스틸관 또는 유리관

(3) 구테루나다니쉬 농축기

3) 시약 및 시액

가) 내부표준물질용액 : 플루오렌(fluorene) 또는 벤조페논 50 mg을 디클로로메탄에 녹여 100 mL로 한다.

나) 표준용액 : BHA, BHT 각 50 mg을 디클로로메탄에 녹여 100 mL로 한다. 사용시 이 액 10 mL와 내부표준물질용액 10 mL를 취하여 디클로로메탄으로 50 mL로 한다.

다) 칼럼충진제 : 60～80메쉬(mesh)의 규조토(크로모솔브 W, 가스크롬 Q등)에 OV 17(5%) 또는 SE-30(5～10%)을 각각 입힌다.

4) 시험용액의 조제

가) 유지(액상식물유)

검체 5 g을 달아 펜탄(pentane) 20 mL에 녹인 다음 펜탄포화아세토니트릴 100 mL로 4회 추출한다. 추출액은 합쳐서 쿠데르나-다니쉬(Kuderna-Danish) 농축기로 용매가 1～2 mL 남을 때까지 농축한 다음 내부표준물질 1.0 mL와 디클로로메탄을 가하여 전량을 5.0 mL로 하여 시험용액으로 한다.

나) 버터․마가린 등

검체를 40℃에서 가온하여 녹이고 그 5 g을 달아 펜탄(pentane) 15 mL를 넣어 혼합한 다음 28% 암모니아수 5 mL를 넣고 10분간 진탕하여 펜탄(pentane)층을 취한다. 물층은 펜탄(pentane) 10 mL로 씻고 펜탄(pentane)층을 합친다. 다음에 무수황산나트륨 5 g을 가하여 10분간 방치한 다음 여과한다. 잔사(residue)를 펜탄(pentane) 10 mL로 씻고 여액을 합친다. 여액을 펜탄포화아세토니트릴 100 mL로 3회 추출하여 추출액을 합치고 쿠데르나-다니쉬(Kuderna-Danish) 농축기로 농축한다. 130℃에서 15시간(또는 600℃에서 4시간, 800℃에서 2시간) 활성화한 후로리실 5 g을 칼럼관(10 mm×30 cm)에 넣고 다음 아세토니트릴 약 20 mL를 유출시켜 씻는다. 이 칼럼에 앞의 농축액을 가하고 농축플라스크용 수기에 1분간에 2 mL의 유출속도로 칼럼상부에 용액이 소량 남을 정도까지 유출시키고 다음에 앞의 농축용기를 아세토니트릴 2 mL로 3회 씻어 칼럼에 넣고 다시 아세토니트릴 10 mL를 가하여 유출시킨다. 유출액을 감압 농축하고 1～2 mL로 한 다음 내부표준물질용액 1.0 mL 및 디클로로메탄으로 전량을 5.0 mL로 하여 시험용액으로 한다.

<가스크로마토그래프 측정조건의 예>

- 주입부온도 : 200℃

- 칼럼온도 : 150～180℃

- 검출기온도 : 180～210℃

- 캐리어가스 및 유량 : N230～60 mL/min

다) 어패건제품․어패염장품․어패냉동품

잘게 썰은 검체 5～20 g을 달아 보조 뚜껑이 달린 블랜더(Blender with cap)에 옮기고 무수황산나트륨 약 15 g, 펜탄(pentane) 100 mL를 가하여 약 2분간 균일하게 섞은 다음 여과한다. 잔사(residue)에 펜탄(pentane) 100 mL를 가하여 추출을 되풀이하고 여액은 앞의 액에 합친다. 여액을 농축하여 약 20 mL로 한다. 이하 가) 유지(액상식물유)에 따라 조작한다.

5) 시험방법

시험용액 및 표준용액에 대하여 3.1.2 프로피온산 및 그 염류 가. 기체크로마토그래프에 의한 정성 및 정량 5) 시험방법 가) 기체크로마토그래프의 측정조건에 따라 시험한다.

6) 정성시험

시험용액 및 표준용액을 앞의 조건에 따라 기체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준용액과 시험용액의 머무름 시간(retention time)이 일치하여야 한다.

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액을 앞의 조건에 따라 기체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 피크의 높이 또는 면적으로부터 내부표준법에 따라 정량한다.