3.3.2 몰식자산프로필

가. 정성시험

검체 약 30 g을 비커에 취해(필요시 약간 가온한다) 석유에테르 약 60 mL에 녹여 분액깔때기에 옮기고 물 15 mL를 가하여 1분간 진탕한 후 물층을 다른 분액깔때기에 취한다. 석유에테르층은 물 15 mL로 2회 같은 조작을 하고 물층을 합한 다음 물층에 에테르 15 mL를 가한다. 1분간 진탕하고 에테르층을 비커에 취하여 증발건조시킨 후 잔류물에 50% 알코올용액 4 mL를 가하여 잘 섞고 암모니아수 1 mL를 가한다. 이 때 적색을 띠면 몰식자산 프로필이 존재한다(변색이 불안전하므로 수분 후에 사라진다).

나. 정량시험

1) 분석원리

식품 중의 몰식자산프로필을 석유에테르로 추출하고, 용매추출 등을 통하여 정제한 다음, 주석산제일철용액과 정색반응하여 생성된 착화합물을 분광광도계로 정량분석하는 방법이다.

2) 장치

가) 분광광도계

3) 시약 및 시액

가) 석유에테르 : 증류범위 30～60℃의 석유에테르 1용량과 증류범위 60～100℃의 석유에테르 3용량을 잘 섞은 후 그 양의 1/10량 만큼의 황산을 가해 5분간 진탕한 후 방치하고, 산층은 버리고 석유에테르층을 취해 물로 여러번 씻어낸 후, 1% 암모니아수로 한번 씻은 다음 알칼리층은 버리고 석유에테르층을 취해 물로 중성이 될 때까지 씻고 증류 정제한다.

나) 초산암모늄용액 : 1.25, 1.67 및 10% 초산암모늄수용액을 만들고 필요시 5% 알코올용액으로 1.67% 초산암모늄용액도 만든다.

다) 주석산제일철용액 : 황산제일철 0.100 g 및 주석산칼륨나트륨 0.500 g을 물에 녹여 100 mL로 한다. 만든 후 3시간 안에 사용해야 한다.

라) 몰식자산프로필표준용액：50 mg의 몰식자산프로필을 물에 녹여 1 L로 한다(50 μg/mL).

4) 시험용액의 조제

검체 약 40 g을 정밀히 달아 석유에테르에 녹여 250 mL가 되게 한 다음 그 중 100 mL를 분액깔때기에 취하고 1.67% 초산암모늄용액 20 mL씩으로 3회 추출하여 물층은 100 mL 메스플라스크에 합한다. 석유에테르층은 물 15 mL를 가하고 30초간 진탕한 후 물층을 다시 합하여 10% 초산암모늄용액 2.5 mL를 가하고 물로 100 mL가 되게 한 다음 여과하여 시험용액으로 한다(유화가 심한 검체는 추출 전에 n-옥탄올 2 mL를 가하여 5% 알코올용액을 사용하여 만든 1.67% 초산암모늄용액으로 추출한다).

5) 시험방법

시험용액은 20 mL이하, 대조액은 1.25% 초산암모늄용액 20 mL를 각각 25 mL메스플라스크에 취하여 주석산제일철용액 1 mL를 가하고 물로 채워 잘 흔들어 섞은 후 3분 안에 540 nm에서 흡광도를 측정하여 검량선으로부터 몰식자산프로필양을 계산한다. 따로 몰식자산프로필 표준용액 1, 2, 4, 6, 8 mL를 25 mL메스플라스크에 취해 물로 약 17.5 mL가 되도록 가하고 검체와 동일하게 처리하여 검량선을 작성한다.