3.3.3 이.디.티.에이.이나트륨(Disodium Ethylenediaminetetraacetate), 이.디.티.에이.칼슘이나트륨(Calcium Disodium Ethylenediaminetetraacetate)

가. 액체크로마토그래프에 의한 정성 및 정량

1) 시험법 적용범위

통․병조림식품, 소스류, 음료류, 마가린, 식초절임 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

식품 중의 이.디.티.에이.이(EDTA(ethylene diamine tetraacetic acid)) 및 그 염류를 물로 추출한 후, 염화제이철용액을 가하여 생성된 Fe-EDTA를 액체크로마토그래프로 정성 및 정량분석하는 방법이다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프 : 자외선흡광검출기(UV photometric detector)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 0.01M TBA-OH용액：40% TBA-OH(Tetrabutylammonium hydroxide)용액 6.5 mL에 물 900 mL를 가하고 초산으로 pH 3.0로 조정한 다음 물을 가하여 1,000 mL로 한다.

나) 0.01M 염화제이철용액：염화제이철(FeCl3․6H2O) 0.27 g을 0.01N 염산에 녹여 100 mL로 한다.

다) 표준용액 : 이.디.티.에이.이나트륨(2수화물) 약 110.7 ㎎을 정밀히 달아 물을 가하여 100 mL로 한다.

5) 시험용액의 조제

액상검체(소스류, 음료류, 마가린류 등)는 약 20 g을 취하고, 고체검체(통․병조림식품, 오이초절임, 양배추초절임 등)는 잘 갈은 후 약 20 g을 취하고 물 40 mL 및 디클로로메탄 40 mL를 가하여 진탕혼합한 다음 6,000 rpm, 15분간 원심분리한다. 물층을 100 mL 플라스크에 취하고 잔류물에 물 40 mL를 가하여 진탕혼합한 다음 다시 원심분리한다. 물층을 합하고 물을 가하여 100 mL로 한 후 여과한다(음료류의 경우 원심분리과정을 생략하고, 통조림식품의 경우 물추출액에 10% 황산아연용액 6 mL와 페놀프탈레인시액 2방울을 가한 다음 엷은 적색이 나타날 때까지 1% 수산화나트륨용액을 가한 후 물로 100 mL되게 한 후 여과한다). 여액 25 mL를 취하여 감압농축기를 이용하여 증발농축한 다음 잔류물을 0.01M 염화제이철용액 5 mL로 녹이고 물을 가하여 10 mL로 한 후 멤브레인필터로 여과하여 시험용액으로 한다. 따로 표준원액 0.1～0.5 mL에 0.01M 염화제이철용액 5 mL를 넣은 다음 물을 가하여 10 mL로 하여 멤브레인필터로 여과하여 표준용액으로 한다.

6) 시험방법

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 검출기 : 자외선흡광검출기(UV photometric detector), 255 nm

(2) 칼럼：Zorbax ODS 또는 이와 동등한 것

(3) 이동상：0.01 M TBA-OH용액：에탄올(19:1)

(4) 이동상유량：1.0 mL/min

(5) 주입량 : 10～20 μL

7) 정성시험

시험용액 및 표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준용액과 시험용액의 머무름 시간(retention time)이 일치하여야 한다.

8) 정량시험

시험용액 및 표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 표준용액의 피크의 높이 또는 면적으로부터 작성한 검량선을 이용하여 시험용액 중의 이.디.티.에이.이나트륨의 함량을 산출한다.