3.3.4 부틸히드록시아니졸(BHA), 디부틸히드록시톨루엔(BHT), 터셔리부틸히드로퀴논(TBHQ) 및 몰식자산프로필(PG)

가. 액체크로마토그래프에 의한 정성 및 정량

1) 시험법 적용범위

식용유지, 버터, 어패건제품, 어패염장품, 어패냉동품등 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

식품 중의 BHA, BHT, TBHQ 및 PG를 헥산으로 용해․추출하고, 용매추출을 통하여 정제한 다음, 액체크로마토그래프로 정성 및 정량분석하는 방법이다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프 : 자외선흡광검출기(UV photometric detector)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 표준용액

BHA, TBHQ 각 50 ㎎과 PG 25 ㎎, BHT 100 ㎎을 이소프로판올 및 아세토니트릴혼액 (1 : 1)에 녹여 50 mL로 한다. 사용시 이액 10 mL를 취하여 위의 혼액으로 100 mL로 한다.

5) 시험용액의 조제

가) 유지(액상식물유)

균질화한 검체 5 g을 비커에 달아, 5 mL 헥산이 들어 있는 125 mL분액깔때기에 옮기고, 헥산 15 mL로 여러번 나누어서 비커를 씻어 분액깔때기에 합친다.★여기에 헥산포화아세토니트릴 50 mL 씩으로 3회 추출하고(만약 유탁형태가 일어나면 뜨거운 물에 분액깔때기를 5～10초 동안 담구어서 분리한다), 추출액을 250 mL 분액깔때기에 합한다. 이 액을 농축플라스크에 서서히 옮겨 40℃이하의 수욕에서 감압농축기를 사용하여 감압건고한 후 헥산포화아세토니트릴로 씻어 전량을 5 mL로 한후, 이소프로판올 5 mL로 플라스크를 씻어 전량을 10 mL로 하여 시험용액으로 한다.

나) 버터, 마가린 등

검체를 60℃에서 가온하여 녹인 후, 그 2.5 g을 비커에 달아 5 mL 헥산이 들어 있는 125 mL 분액깔때기를 옮기고, 헥산 17.5 mL로 여러번 나누어서 비커를 씻어 분액깔때기에 합친다. 가) 유지(액상식물유)의 ★ 이하에 따라 조작한다.

다) 어패건제품, 어패염장품, 어패냉동품 등

잘게 썰은 검체 5～20 g을 달아 보조 뚜껑이 달린 블랜더(Blender with cap)에 옮기고 무수황산나트륨 약 15 g, 헥산 100 mL를 가하여 약 2분간 균일하게 섞은 다음 여과한다. 잔사(residue)에 헥산 100 mL를 가하여 추출을 되풀이하고, 여액을 합친다. 여액을 농축하여 약 20 mL로 한다. 가) 유지(액상식물유)의 ★ 이하에 따라 조작한다.

6) 시험방법

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 검출기 : 자외선흡광검출기(UV photometric detector), 280nm

(2) 칼럼：Capcell Pak C
18(4.6 mm × 250 mm × 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 90% 아세토니트릴(1% 초산)

(나) 이동상 B : 1% 초산

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	30	70
5	70	30
10	95	5
15	95	5
20	30	70

(4) 컬럼온도 : 40℃

(5) 유속：1.0 mL/분

(6) 주입량 : 10 μL

7) 정성시험

시험용액 및 표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준용액과 시험용액의 머무름 시간(retention time)이 일치하여야 한다.

8) 정량시험

시험용액 및 표준용액을 10 μL를 앞의 조건에 따라, 액체크로마토그래프칼럼에 주입하고, 얻어진 피크의 높이 또는 면적으로부터 다음 식에 따라 검체 중의 BHA, BHT, TBHQ 및 PG의 양을 산출한다.

산화방지제(g/kg)＝각 표준용액의 농도(mg/L)	×	PA	×	10	×	1
		PS		SA[g]		1,000

PS：표준용액의 높이 또는 면적

PA：시험용액의 높이 또는 면적

SA：검체의 채취량(g)