4.4 배지 및 시액

4.4.1 배지

미생물 시험을 위한 배지조제 시 이미 상품화된 배지의 사용이 가능하며, 사용할 경우 각 제조사별 조제법을 따를 수 있다.

1) 표준한천배지(Plate Count Agar)

Tryptone5.0 g

Yeast Extract2.5 g

Dextrose1.0 g

Agar15.0 g

위의 성분에 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.0±0.2로 조정한 후 121℃로 15분간 멸균한다.

2) 유당배지(Lactose Broth)

Peptone5.0 g

Beef Extract3.0 g

Lactose5.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.9±0.2로 조정한 후 발효관을 넣은 시험관에 10 mL씩 분주하여 121℃에서 15분간 멸균한다.

3) BGLB배지(Brilliant Green Lactose Bile Broth)

Peptone10.0 g

Lactose10.0 g

Oxgall20.0 g

Brilliant green0.0133 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.2±0.1로 조정한 후 발효관을 넣은 시험관에 10 mL씩 분주하여121℃에서 15분간 멸균한다. 필요에 따라 MUG 50 mg을 첨가하여 사용한다(BGLB-MUG).

4) 두배농도 BGLB배지(Brilliant Green Lactose Bile Broth)

Peptone20.0 g

Lactose20.0 g

Oxgall40.0 g

Brilliant green0.0266 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.2±0.1로 조정한 후 발효관을 넣은 시험관에 10 mL씩 분주하여 121℃에서 15분간 멸균한다.

5) Endo 한천배지(Endo Agar)

Peptone10.0 g

Lactose10.0 g

Dipotassium Phosphate3.5 g

Sodium Sulfite2.5 g

Basic Fuchsin0.5 g

Agar15.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.4±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

6) EMB 한천배지(Eosine Methylene Blue Agar)

Peptone10.0 g

Lactose5.0 g

Sucrose5.0 g

Dipotassium Phosphate2.0 g

Eosin Y0.4 g

Methylene Blue0.065 g

Agar13.5 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.8±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

7) 보통배지(Nutrient Broth)

Peptone5.0 g

Beef Extract3.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.0～7.4로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

8) 보통한천배지(Nutrient Agar)

Peptone5.0 g

Beef Extract3.0 g

Agar15.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.8±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

9) 데스옥시콜레이트유당한천배지(Desoxycholate Lactose Agar)

Peptone10.0 g

Lactose10.0 g

Sodium Chloride5.0 g

Sodium Citrate2.0 g

Sodium Desoxycholate0.5 g

Neutral Red0.03 g

Agar15.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.3～7.5로 조정한 후 1분간 가열한다. 단, 고압증기멸균을 해서는 안 된다.

10) EC 배지(EC Broth)

Peptone20.0 g

Lactose5.0 g

Bile Salt Mixture1.5 g

Dipotassium Phosphate4.0 g

Monopotassium Phosphate1.5 g

Sodium Chloride5.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.9±0.2로 조정한 후 발효관을 넣은 시험관에 10 mL 씩 분주하여 121℃에서 15분간 멸균한다.

11) BCP첨가 평판측정용 한천배지(Plate Count Agar with Bromocresol Purple)

Peptone5.0 g

Yeast Extract2.5 g

Dextrose1.0 g

Tween 801.0 g

L-Cysteine0.1 g

Bromocresol Purple0.05 g

Agar15.0 g

위의 성분(다만, 종균에 따라 적정 peptone을 사용하여야 함)을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.8±0.2으로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

12) 포테이토 덱스트로즈 한천배지(Potato Dextrose Agar)

Potato Infusion200.0 g

Dextrose20.0 g

Agar15.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 5.6±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균하여 식히고 멸균된 10% 주석산을 무균적으로 가하여 pH를 3.5±0.1로 맞춘다.

13) 티오글리콜린산염배지(Fluid Thioglycollate Medium)

Yeast Extract5.0 g

Casitone15.0 g

Dextrose5.0 g

Sodium Chloride2.5 g

L-Cystine0.75 g

Thioglycolic Acid0.5 g

Agar0.75 g

Resazurin0.001 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH를 7.1±0.2로 조정하고 121℃에서 15분간 멸균한 후 찬물에 급냉하여 레자즈린(resazurin, 붉은색) 층이 나타나게 한다.

14) 난황첨가 만니톨 식염한천배지(Mannitol Salt Agar with Egg Yolk)

Beef Extract2.5 g

Peptone10 g

Mannitol10 g

Sodium Chloride75 g

Agar15 g

Phenol Red0.025 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 가열 용해한 후 pH 7.2～7.6으로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균하고 50℃정도로 식혀 난황액(시액 8)을 10%의 비율로 무균적으로 가해 잘 혼합한 후 사용한다.

15) BL 한천배지(BL Agar)

Beef Extract Liver Extract Yeast Extract Proteose Peptone Tryptone Soypeptone Soluble Starch Glucose Dipotassium Phosphate Monopotassium Phosphate Magnesium Sulfate Sodium Chloride Manganese Sulfate L-Cysteine․HCl․H2O Ferrous Sulfate Polysorbate 80(Tween 80) Agar

3 g 5 g 5 g 10 g 5 g 3 g 0.5 g 10 g 1 g 1 g 0.2 g 0.01 g 0.0067 g 0.5 g 0.01 g 1 g 15 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균하여, 50℃로 냉각시킨 후 소, 말, 양의 탈 섬유소 혈액을 5% 되도록 첨가한다.

16) Alkaline 펩톤수(Alkaline Peptone Water)

Peptone10 g

Sodium Chloride20 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 8.6(당을 포함한 제품의 경우에는 pH 9.2)으로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

17) TCBS 한천배지(Thiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose Agar)

Yeast Extract5 g

Peptone10 g

Sodium Citrate10 g

Sodium Thiosulfate10 g

Oxgall5 g

Sodium Cholate3 g

Sucrose20 g

Sodium Chloride10 g

Ferrous Citrate1 g

Bromothymol Blue0.04 g

Thymol Blue0.04 g

Agar15 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 8.6으로 조정한 후 가열하여 사용한다. 단, 고압증기멸균을 해서는 안 된다.

18) LIM 반유동배지(Lysine Indole Motility Medium)

Peptone10 g

Yeast Extract3 g

Dextrose3 g

Bromocresol Purple0.02 g

L-Lysine Hydrochloride10 g

L-Tryptophan0.5 g

Agar3 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.7로 조정한 후 시험관에 분주하여 121℃에서 15분간 멸균하여 사용한다.

19) VP 반유동배지(Voges-Proskauer Broth)

Yeast Extract1 g

Casein Peptone7 g

Soy Peptone5 g

Dextrose10 g

Sodium Chloride5 g

Agar3 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹인 후 pH 7.0～7.2로 조정한 후 시험관에 분주하여 121℃에서 15분간 멸균한다.

20) Purple Broth Base

Proteose Peptone10 g

Beef Extract1 g

Sodium Chloride5 g

Bromocresol Purple0.015 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.8±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

21) Moeller Basal 배지(Moeller Basal Broth)

Peptone5 g

Beef Extract5 g

Dextrose0.5 g

Bromocresol Purple0.01 g

Cresol Red0.005 g

Pyridoxal Hydrochloride0.005 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.0으로 조정한 후 시험관에 분주하여 121℃ 에서 15분간 멸균한다. 균을 접종 후 멸균 유동파라핀을 중층한다.

22) ONPG 배지(O-nitrophenyl-β-D-galacto-pyranoside Broth)

Peptone7.5 g

Sodium Chloride3.75 g

ONPG1.5 g

Disodium Phosphate0.355 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.5으로 조정한 후 시험관에 2.5 mL 씩 분주하여 사용한다.

23) TSB 배지(Tryptic Soy Broth)

Tryptone17 g

Soytone3 g

Dextrose2.5 g

Sodium Chloride5 g

Dipotassium Phosphate2.5 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.3±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

24) 3% Ogawa 배지

Monopotassium Phosphate3.0 g

Sodium Glutamate1.0 g

Glycerin6.0 mL

2% Malachite Green6.0 mL

위의 성분을 증류수 100 mL에 녹이고 121℃에서 15분간 멸균한다. 50℃로 냉각시킨 후 달걀액(Egg-Homogenate) 200 mL을 넣고 충분히 혼합하여 5 mL씩 멸균시험관에 분주한 다음 85～90℃에서 60분간 가열한다.

25) TOS-MUP 배지

Trypticase peptone10 g

Yeast Extract1 g

KH2PO43 g

K2HPO44.8 g

(NH4)2SO43 g

Magnesium Sulfate 7H2O0.2 g

(R)-Cysteine-HCl·H2O0.5 g

Sodium propionate15 g

TOS(Galactooligosaccharide)10 g

Agar15 g

위의 성분을 증류수 950 mL에 녹이고 pH를 6.3±0.2로 조정한 후 115℃에서 15분간 멸균하여 50℃정도로 식힌 다음 MUP(mupirocin) supplement(1 mg/mL)를 주사필터(0.2 μm)한 후 50 mL를 위의 배지에 첨가한다.

26) Liver 한천배지(Liver agar)

Beef Liver Infusion20 g

Proteose Peptone10 g

Sodium Chloride5 g

Agar20 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹인 후 121℃에서 15분간 멸균한다. 일반세균의 증식을 억제하기 위하여 배지에 Bactracin(25 units/mL), Vancomycin(20 ㎍/mL), Polymyxin B(5 units/mL), Nalidixic acid (5 ㎍/mL)과 Cycloheximide(100 ㎍/mL)을 첨가한다.

27) 클로스트리디움 퍼프린젠스 한천배지(Clostridium Perfringens Agar)

Heart Infusion5 g

Casein Peptone10 g

Proteose Peptone10 g

Sodium Chloride5 g

Lactose10 g

Phenol Red0.05 g

Agar20 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.5±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균 후 배지를 50℃정도로 식혀 난황액(시액 8)을 10%가 되도록 첨가한다.

28) Selenite F 배지(Selenite F Broth)

Polypeptone5.0 g

Lactose4.0 g

Disodium Phosphate10.0 g

Sodium Selenite4.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.0±0.2로 조정하고 가열 용해한다.

29) SS 한천배지(Salmonella Shigella Agar)

Beef Extract5.0 g

Proteose Peptone5.0 g

Lactose10.0 g

Bile Salt No.38.5 g

Sodium Citrate8.5 g

Sodium Thiosulfate8.5 g

Ferric Citrate1.0 g

Agar13.5 g

Brilliant Green0.0033 g

Neutral Red0.025 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.0±0.2로 조정하고 가열 용해한다.

30) MacConkey 한천배지(MacConkey Agar)

Peptone17.0 g

Polypeptone3.0 g

Lactose10.0 g

Bile Salts No.31.5 g

Sodium Chloride5.0 g

Neutral Red0.03 g

Crystal Violet0.001 g

Agar13.5 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.1±0.2로 조정하고 가열 용해한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

31) Desoxycholate Citrate 한천배지(Desoxycholate Citrate Agar)

Beef Extract5.0 g

Peptone5.0 g

Lactose10.0 g

Sodium Citrate8.5 g

Sodium Thiosulfate5.4 g

Ferric Ammonium Citrate1.0 g

Sodium Desoxycholate5.0 g

Neutral Red0.02 g

Agar12.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.5±0.2로 조정하고 가열 용해한다.

32) TSI 사면배지(Triple Sugar Iron Agar)

Beef Extract3.0 g

Yeast Extract3.0 g

Peptone20.0 g

Lactose10.0 g

Sucrose10.0 g

Dextrose1.0 g

Ferrous Sulfate0.2 g

Sodium Chloride5.0 g

Sodium Thiosulfate0.3 g

Phenol Red0.24 g

Agar13.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.4±0.2로 조정하고 가열용해 한 후 시험관에 분주하여 121℃에서 15분간 멸균한 후 사면으로 굳혀 사용한다.

33) Cooked Meat 배지(Cooked Meat Medium)

Beef Heart454 g

Proteose Peptone20 g

Dextrose2 g

Sodium Chloride5 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.2±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

34) GAM
배지(Gifu Anaerobic Medium)

Peptone10 g

Soytone3 g

Proteose Peptone10 g

Bovine Serum Albumin13.5 g

Yeast Extract5 g

Beef Extract2.2 g

Monopotassium Phosphate2.5 g

Liver Extract1.2 g

Sodium Chloride3 g

L-Cystein0.3 g

Sodium Thioglychollate0.3 g

Agar1.5 g

Sugar10 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 가열용해한 후 시험관에 분주하여 115℃에서 15분간 멸균 후 급냉시켜 사용한다. 당 분해능 확인시험을 위해 Sugar는 시험항목에 해당하는 것을 선택하여 사용한다.

35) Listeria 증균배지(Listeria Enrichment Broth)

Tryptone17 g

Soytone3 g

Glucose2.5 g

Sodium Chloride5 g

Dipotassium Phosphate2.5 g

Yeast Extract6 g

Cycloheximide0.05 g

Acriflavin HCl0.015 g

Nalidixic Acid0.04 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.3±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

36) UVM Modified Listeria 증균배지(UVM Modified Listeria Enrichment Broth)

Tryptose10 g

Beef Extract5 g

Yeast Extract5 g

Sodium Chloride20 g

Disodium Phosphate9.6 g

Monopotassium Phosphate1.35 g

Esculin1 g

Nalidixic Acid0.02 g

Acriflavin HCl0.012 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.2±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

37) Fraser Listeria 배지(Fraser Listeria Broth)

Tryptose10 g

Beef Extract5 g

Yeast Extract5 g

Sodium Chloride20 g

Disodium Phosphate9.6 g

Monopotassium Phosphate1.35 g

Esculin1 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 121℃에서 15분간 멸균하여 50℃로 식힌 후 다음의 Supplement를 차례로 여과멸균하여 가한다.

Supplement ; Nalidixic Acid 0.02 g, Acriflavin HCl 0.021 g, Lithium Chloride 3 g

38) Oxford 한천배지(Oxford Agar)

Columbia blood agar base 39 g

Esculin 1 g

Ferric ammonium citrate 0.5 g

Lithium chloride 15 g

Agar 2 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.0±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균하고50℃정도로 식힌 후다음의 Supplement를 차례로 여과멸균하여 가한다.

Supplement ; Cycloheximide 0.4 g, Colistin Sulfate 0.02 g, Acriflavin 0.005 g, Cefotetan 0.002 g, Fosfomycin 0.01 g

39) LPM 한천배지(Lithium Chloride Phenylethanol Moxalactam Agar)

Tryptose10 g

Beef Extract3 g

Sodium Chloride5 g

Lithium Chloride5 g

Glycine Anhydride10 g

Phenylethanol2.5 g

Agar15 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.3±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균하고 이를 50℃정도로 식힌 후 Moxalactam 0.02g을 여과멸균하여 가한다.

40) Tryptic Soy 한천배지(Tryptic Soy Agar)

Tryptose17 g

Soytone3 g

Glucose2.5 g

Sodium Chloride5 g

Dipotassium Phosphate2.5 g

Agar15 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.3±0.2로 조정 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

41) TSC 한천배지(Tryptose-Sulfite-Cycloserine Agar)

Tryptose15 g

Yeast Extract5 g

Soytone5 g

Ferric Ammonium Citrate1 g

Sodium Metabisulfite1 g

Agar20 g

위의 성분에 증류수 900 mL를 가하여 녹인 후 pH 7.6±0.2로 조정한다. 이를 500 mL Flask에 250 mL씩 분주한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.이를 50℃정도로 식힌 후 D-cycloserine solution 20 mL와 난황액(시액 8)을 10%가 되도록 첨가한다.

D-cycloserine solution은 D-cycloserine 1 g을 200 mL의 증류수로 용해한 후 여과멸균하여 4℃로 보관하여 사용한다.

42) mEC 배지(mEC Broth)

Tryptone20 g

Bile Salt No.31.5 g

Lactose5.0 g

Dipotassium Phosphate4.0 g

Monopotassium Phosphate1.5 g

Sodium Chloride5 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.9±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균하여 식히고, Novobiocin Sodium 0.02 g을 여과멸균하여 가한다.

43) MacConkey Sorbitol 한천배지(MacConkey Sorbitol Agar)

Peptone15.5 g

Proteose Peptone3 g

D-Sorbitol10 g

Bile Salts1.5 g

Sodium Chloride5 g

Agar15 g

Neutral Red0.03 g

Crystal Violet0.001 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹인 후 pH 7.1로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

44) PSBB 배지(Peptone Sorbitol Bile Broth)

Disodium Phosphate8.23 g

Monosodium Phosphate1.2 g

Bile Salts No.31.5 g

Sodium Chloride5 g

D-Sorbitol10 g

Peptone5 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹인 후 pH 7.6으로 조정하고 121℃에서 15분간 멸균하여 사용한다.

45) CIN 한천배지(Cefsulodin Irgasan Novobiocin Agar)

Peptone20 g

Yeast Extract2 g

Mannitol20 g

Sodium Pyruvate2 g

Sodium Chloride1 g

Magnesium Sulfate Heptahydrate0.01 g

Agar12 g

위의 성분을 750 mL의 증류수에 녹여 충분히 끓인 후 80℃로 식히고 95% 에탄올에 녹인 0.4% Irgasan 1mL 넣어 완전히 섞는다. 다음으로 200 mL의 desoxycholate 용액(증류수 200 mL에 sodium desoxycholate 0.5 g을 녹인 것)에 neutral red 10 mL(3 ㎎/mL), crystal violet 10 mL(0.1 ㎎/mL), cefsulodin 10mL(1.5 ㎎/mL), novobiocin 10 mL(0.25 ㎎/mL)를 가하여 준다. 천천히 흘리면서 10% strontium chloride 10mL를 넣는다. 1N NaOH로 pH 7.4로 조정한 후 분주하여 사용한다. 이 때 멸균 후 첨가하는 모든 시약은 멸균하여 사용한다.

46) MYP 한천배지(Mannitol Egg Yolk Polymyxin agar)

Beef Extract1 g

Peptone10 g

Mannitol10 g

Sodium Chloride10 g

Phenol Red0.025 g

Agar15 g

위의 성분을 증류수 900 mL에 녹이고 pH 7.2로 조정한 후 500 mL 플라스크에 225 mL씩 분주하고 121℃에서 15분간 멸균하여 50℃로 식힌 다음 Polymyxin B 용액(10,000 unit/mL) 2.5 mL와 난황액(시액 8)12.5 mL를 각각 넣어 혼합한다.

47) HUNT(CEB) 배지(Hunt broth, Campylobacter Enrichment Broth)

Beef Extract10 g

Peptone10 g

Sodium Chloride5 g

Yeast Extract6 g

Ferrous Sulfate0.25 g

Sodium Metabisulfite0.25 g

Sodium Pyruvate0.25 g

위의 성분을 증류수 950 mL에 녹인 후 pH 7.5로 조정하고 121℃에서 15분간 멸균하여 식힌 다음 용혈시킨 말 혈액(Lysed Horse Blood) 50 mL, Supplement A 또는 Supplement B를 여과 멸균하여 가한다.

Supplement A : Sodium Cefoperazone 0.032 g, Trimethoprim Lactate 0.015 g, Vancomycin 0.01 g, Amphotericin B 0.002 g

Supplement B : Sodium Cefoperazone 0.032 g, Trimethoprim Lactate 0.015 g, Vancomycin 0.01 g, Rifampicin 0.005 g

48) Modified Campy Blood Free 한천배지(Modified Campy Blood Free Agar)

Meat Extract10.0 g

Yeast Extract2.0 g

Peptone10.0 g

Sodium Chloride5.0 g

Bacteriological Charcoal4.0 g

Casein Hydrolysate3.0 g

Sodium Deoxycholate1.0 g

Ferrous Sulphate0.25 g

Sodium Pyruvate0.25 g

Agar12.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.4로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균하고50℃정도로 식힌 후다음의 Supplement를 차례로 여과 멸균하여 가한다.

Supplement : Sodium Cefoperazone 0.032 g, Rifampicin 0.005 g, Amphotericin B 0.002 g

49) Abeyta-Hunt Blood 한천배지(Abeyta-Hunt Blood Agar)

Heart infusion broth25 g

Agar15 g

Yeast Extract2 g

위의 성분을 증류수 950 mL에 녹여 pH 7.4로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균하여 식힌 다음 용혈시킨 말 혈액(Lysed Horse Blood) 50 mL을 가하고 다음의 Supplement를 차례로 여과멸균하여 가한다.

Supplement : Sodium Cefoperazone 0.032 g, Rifampicin 0.005 g, Amphotericin B 0.002 g

50) TPGY 배지(Trpticase Peptone Glucose Yeast Extract Broth)

Trypticase50 g

Peptone5 g

Yeast Extract20 g

Dextrose4 g

Sodium Thioglycollate1 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹인 후 pH 7.0으로 조정하고, 15 mL씩 시험관에 분주하여 121℃에서 10분간 멸균한다.

51) Liver-Veal 난황한천배지(Liver-Veal Egg Yolk Agar)

Liver Infusion50.0 g

Veal Infusion500.0 g

Proteose Peptone20.0 g

Neopeptone1.3 g

Tryptone1.3 g

Dextrose5 g

Soluble Starch10 g

Isoelectric Casein2 g

Sodium Chloride5 g

Sodium Nitrate2 g

Gelatin20 g

Agar15 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 121℃에서 15분간 멸균한 후, 50℃정도로 식혀 난황액(시액 8)을 10%가 되도록 무균적으로 가한다.

52) 혐기성 난황 한천배지(Anaerobic Egg Yolk Agar)

Yeast Extract5 g

Tryptone5 g

Proteose Peptone20 g

Sodium Chloride5 g

Agar20 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.0으로 조정하고, 121℃에서 15분간 멸균한 후 50℃정도로 식혀 난황액(시액 8) 40 mL를 무균적으로 가한다.

53) 세균수 건조필름배지 Ⅰ

Pancreatic Digest of Casein3.4 g

Yeast Extract2.4 g

Sodium Pyruvate6.8 g

Dextrose0.6 g

Dipotassium Phosphate1.3 g

Monopotassium Phosphate0.4 g

Guar Gum91.4 g

2,3,5-Triphenyltetrazolium Chloride0.0205 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹인 후 121℃에서 15분간 멸균하여 건조필름을 제조한다.

54) 대장균군 건조필름배지 Ⅰ

Yeast Extract9.6 g

Pancreatic Digest of Gelatin20.9 g

Bile Salt No. 31.6 g

Peptic Digest of Animal Tissue1.6 g

Lactose21.4 g

Sodium Chloride5.3 g

Crystal Violet0.002 g

Neutral Red0.1 g

Guar gum65.7 g

2,3,5-Triphenyltetrazolium Chloride0.11 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹인 후 121℃에서 15분간 멸균하여 건조필름을 제조한다.

55) 대장균 건조필름배지 Ⅰ

Yeast Extract9.6 g

Pancreatic Digest of Gelatin20.9 g

Bile Salt No. 31.6 g

Peptic Digest of Animal Tissue1.6 g

Lactose21.4 g

Sodium Chloride5.3 g

Crystal Violet0.002 g

Neutral Red0.1 g

Guar gum65.4 g

5-Bromo-4-Chloro-3-Indoxyl-beta-D-Glucuronic Acid,

Cyclohexyl Ammonium Salt0.2 g

2,3,5-Triphenyltetrazolium Chloride0.11 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹인 후 121℃에서 15분간 멸균하여 건조필름을 제조한다.

56) 펩톤수(Peptone water)

Peptone10 g

Sodium Chlroride5 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.2±0.2 되도록 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

57) RV 배지(Rappaport-Vassiliadis broth)

(1) Broth Base

Tryptone5 g

NaCl8 g

KH2PO41.6 g

Distilled water1 L

(2) Magnesium chloride solution

MgCl2･6H2O400 g

Distilled Water1 L

(3) Malachite Green Oxalate Solution

Malachite Green Oxalate0.4 g

Distilled Water100 mL

완전한 배지를 준비하기 위해서 1,000 mL의 Broth base와 100 mL의 Magnesium chloride 용액과 10 mL의 Malachite green oxalate용액을 혼합한다(완전한 배지의 총량은 1110 mL이다). Broth base는 완전한 배지에 첨가되는 성분과 동일한 날에 준비하고 Magnesium Chloride 용액은 1년동안 실온에서 갈색병에 보관이 가능하다.

58) XLD 한천배지(Xylose Lysine Desoxycholate agar)

Yeast extract3 g

L-Lysine5 g

Xylose3.75 g

Lactose7.5 g

Sucrose7.5 g

Sodium Desoxycholate2.5 g

Ferric Ammonium Citrate0.8 g

Sodium Thiosulfate6.8 g

Sodium Chloride5 g

Agar15 g

Phenol Red0.08 g

위의 성분에 증류수 1,000 mL를 가하여 가열용해한 후 사용한다. 단,고압증기멸균해서는 안된다.

59) EE 배지(Enterobacteriaceae Enrichment broth)

Peptone10.0 g

Glucose5.0 g

Disodium Phosphate8.0 g

Monopotassium Phosphate2.0 g

Oxgall20.0 g

Brilliant Green0.015 g

위의 성분을 1,000 mL의 증류수에 가하여 100℃에서 30분간 가열용해 하여 사용한다.

60) CESA 한천배지(Chromogenic Enterobacter sakazakii Agar)

Tryptone15.0 g

Soya Peptone5.0 g

Sodium Chloride5.0 g

Ferric Amonium Citrate1.0 g

Sodium Desoxycholate1.0 g

Sodium Thiosulphate1.0 g

Chromogen0.1 g

Agar15.0 g

위의 성분을 1,000 mL의 증류수에 가열 용해한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

61) VRBG 한천배지(Violet Red Bile Gglucose Agar)

Yeast Extract3.0 g

Peptone7.0 g

Sodium Chloride5.0 g

Bile Salts No. 31.5 g

Lactose10.0 g

Neutral Red0.03 g

Crystal Violet0.002 g

Agar15.0 g

Glucose10.0 g

위의 성분을 1,000 mL의 증류수에 가열 용해하여 사용한다. 단 고압증기멸균을 해서는 안된다.

62) E. sakazakii 한천배지(E. sakazakii Agar)

Tryptone20.0 g

Bile Salts No. 31.5 g

Sodium Thiosulphate1.0 g

Ferric Ammonium Citrate1.0 g

MUG α-D-glucopyranoside0.05 g

Agar15.0 g

위의 성분을 1,000 mL의 증류수에 가열 용해한 후, pH 7.0 ± 0.2 로 조정하고 121℃에서 15분간 멸균한다.

63) Baird-Parker 한천배지(Baird-Parker Agar)

Tryptone10 g

Beef Extract5 g

Yeast Extract1 g

Sodium Pyruvate10 g

Glycine12 g

Lithium Chloride 6H2O5 g

Agar20 g

위의 성분을 증류수 950 mL에 녹이고 pH를 7.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다. 이를 50℃정도로 식힌 다음 0.1% Potassiun Tellurite가 첨가된 난황액(시액 8) 50 mL을 첨가한다.

64) Bismuth Sulfite 한천배지(Bismuth Sulfite Agar)

Peptone10 g

Beef extract5 g

Dextrose5 g

Disodium Phosphate4 g

Ferrous sulfate12 g

Bismuth Sulfite Indicator8 g

Brilliant Green0.025 g

Agar20 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹이고 pH 7.2로 조정한 후 가열하여 사용한다.

65) PALCAM 한천배지(Polymyxin Acriflavin LiCl Ceftazidime Esculin Mannitol Agar)

Peptone23 g

Mannitol10 g

Sodium Chloride5 g

Starch1 g

Ferric Aammouium Citrate0.5 g

Esculin0.8 g

Dextrose0.5 g

Lithium Chloride15.0 g

Phenol Red0.08 g

Agar13 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹이고 pH 7.2±0.2 로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다. 이를 50℃로 식히고 다음의 Supplement를 차례로 여과멸균하여 가한다.

Supplement : Polymyxin B sulfate 0.01 g, Acriflavin 0.005 g, Ceftazidime 0.02 g

66) TC-SMAC 한천배지(Tellurite Cefixime-Sorbitol MacConkey Agar)

Potassium tellurite2.5 mg

(1% Potassium tellurite 용액 250 μL)

Cefixime0.05 mg

(95% 에탄올 용액 1 L에 cefixime 50 mg을 녹인 용액 1 mL)

MacConkey Sorbitol 한천배지(배지43) 1,000 mL을 121℃에서 15분간 멸균하고, 50℃정도로 식힌 다음 여과멸균한 위의 성분들을 차례로 가한다. 1% Potassium tellurite 용액은 4℃에서 1개월간, Cefixime 용액은 -20℃에서 1년간 보관이 가능하다.

67) Baird-Parker RPF한천배지(Baird-Parker RPF Agar)

Tryptone1 g

Beef Extract0.5 g

Yeast Extrac0.1 g

Sodium Pyruvate1 g

Glycine1.2 g

Lithium Chloride 6H2O0.5 g

Agar2 g

위의 성분을 증류수 90 mL에 녹이고 pH를 7.2로 조정한 후 121℃ 15분간 멸균하여 50℃정도로 식힌 다음 RPF Supplement를 첨가한다.

Bovine Fibrinogen0.375 g

Trypsin Inhibitor2.5 mg

Rabbit Plasma2.5 mL

Potassium Tellurite2.5 mg

위의 성분을 멸균증류수 10 mL에 녹인다.

68) Bolton 배지(Bolton Broth)

Meat Pepton10 g

Lactalbumin Hydrolysate5 g

Yeast Extract5 g

Sodium Chloride5 g

Haemin0.01 g

Sodium Pyruvate0.5 g

α-Ketoglutaric acid1 g

Sodium Metabisulphite0.5 g

Sodium Carbonate0.6 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹이고 pH를 7.4로 조정한 후 121℃ 15분간 멸균하여 50℃정도로 식힌 다음 용혈시킨 말 혈액(Lysed Horse Blood) 50ml을 무균적으로 첨가하고 다음의 Supplement를 물과 에탄올을 동량 섞은 용액 10ml에 녹인 후 여과멸균하여 가한다.

Supplement 조성 : Sodium Cefoperazone 20 mg, Trimethoprim 20 mg, Vancomycin 20 mg, Cyclohexamide 50 mg

69) 세균수 건조필름배지 Ⅱ

Peptone5 g

Bonito meat extract(Erlich meat extract)1 g

Yeast extract2.5 g

Glucose1 g

Potassium hydrogen phosphate0.8 g

2,3,5-triphenyl-2H-tetrazolium chloride0.05 g

위의 성분을 1,000 mL에 녹인 후 121℃에서 15분간 멸균하여 건조필름을 제조한다.

70) 대장균군 건조필름배지 Ⅱ

Peptone2 g

Bonito meat extract(Erlich meat extract)8 g

Gall powder1.5 g

Sodium deoxycholate1 g

Sodium dodecyl sulfate1 g

Potassium nitrate1 g

Potassium hydrogen phosphate1 g

Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside0.03 g

5-bromo-4-chloro-3-indoxyl-β-D-galactopyranoside0.5 g

위의 성분을 1,000 mL에 녹인 후 121℃에서 15분간 멸균하여 건조필름을 제조한다.

71) 대장균 건조필름배지 Ⅱ

Peptone2 g

Bonito meat extract(Erlich meat extract)8 g

Gall powder1.5 g

Sodium deoxycholate1 g

Sodium dodecyl sulfate1 g

Potassium nitrate1 g

Potassium hydrogen phosphate1 g

Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside0.03 g

5-bromo-4-chloro-3-indoxyl-β-D-galactopyranoside0.5 g

6-chloro-3indoxyl-β-D-glucuronic acid0.5 g

위의 성분을 1,000 mL에 녹인 후 121℃에서 15분간 멸균하여 건조필름을 제조한다.

72) MMGM(Minerals modified glutamate medium)

Lactose10.0 g

L(+) Glutamic acid6.35 g

L(+) Arginine monohydrochloride0.02 g

L(-) Aspartic acid0.024 g

L(-) Cystine0.02 g

Sodium formate0.25 g

Disodium potassium hydrogen phosphate0.9 g

Ammonium chloride2.5 g

Magnesium sulphate heptahydrate0.1 g

Calcium chloride dihydrate0.01 g

Ferric citrate scales0.01 g

Nicotinic acid0.001 g

Thiamine (Aneurinhydrochloride)0.001 g

Pantothenic acid0.001 g

Bromocresol purple0.01 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.7 ± 0.1로 조정한 후 시험관에 10 mL 씩 분주하여 121℃에서 15분간 멸균한다.

73) BCIG 한천배지(5-bromo-4-chloro-3indolyl-β-D-glucuronide (BCIG) agar)

Tryptone20.0 g

Bile salts No. 31.5 g

Agar15.0 g

BCIG (as cyclohexylammonium salt)0.075 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.2 ± 0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

74) mTSB 배지

Peptone from casein17.0 g

Peptone from soymeal3.0 g

Sodium chloride1.5 g

Bile salts No. 32.5 g

D(+)glucose2.5 g

Di-potassium hydrogen phosphate4.0 g

위의 성분에 증류수를 가하여 1,000 mL로 만들고 끓여 녹인 후 121℃에서 15분간 멸균하고 pH 7.3으로 조정하여 사용한다. 단, O157 검사 시 또는 오염이 심한 검체의 경우, 위의 mTSB 배지(배지 74)를 50℃로 식힌 후, 8 mg/L농도의 여과멸균한 Novobiocin을 첨가하여 사용할 수 있다.

75) Preston 한천배지(Preston Agar)

Lab-Lemcopowder10.0 g

Peptone10.0 g

Sodium chloride5.0 g

Agar12.0 g

증류수 1,000 mL에 위의 성분 37.0 g을 녹이고 pH 7.5±0.2로 조정을 한 다음 121℃에서 15분간 고압증균 멸균한 후 50℃로 식힌다. Laked Horse Blood 52.6 mL과 지시대로 녹인 Supplement와 Campylobacter Growth Supplement를 첨가한다.

Supplement 조성

PolymyxinB5,000 IU

Rifampicin10 mg

Trimethoprim10 mg

Cycloheximide100 mg

76) Campy Cefex 한천배지(Campy Cefex Agar(CCA))

Brucella Agar(Difco 배지)44.0 g

Ferrous sulfate0.5 g

Sodium pyruvate0.5 g

Sodium bisulfite0.25 g

위의 성분을 증류수로 990 mL되게 용해하고 121℃에서 15분간 멸균하여 식히고 Cefoperazone 10 mL 및 Cycloheximide(200 mg/L)을 첨가한다.

77) Blaser's Campylobacter 한천배지(Blaser's Campylobacter Agar(BCA))

Yeast extract5.0 g

Peptone15.0 g

NaCl5.0 g

Agar12.0 g

Liver digest2.5 g

위의 성분에 증류수를 가하여 950 mL되게 용해하여 pH 7.0로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균하여 식히고 용혈된 말혈구(horse blood cell) 50 mL과 Campylobacter Supplement (A) (유제품의 경우 사용가능)를 권장량이 되게 첨가한다.

78) Preston 배지(Preston broth)

Lab-Lemco powder10.0 g

Peptone10.0 g

Sodium chloride5.0 g

증류수 1,000 mL에 위의 성분을 녹이고 pH 7.5±0.2로 조정을 한 다음 121℃에서 15분간 고압증균 멸균한 후 50℃로 식힌다. Laked Horse Blood 52.6 mL과 지시대로 녹인 Supplement와 Campylobacter Growth Supplement를 첨가한다.

Supplement 조성

Polymyxin B5,000 IU

Rifampicin10.0 mg

Trimethoprim10.0 mg

Cycloheximide100.0 mg

79) 혈액한천배지(Blood Agar)

Tryptone15.0 g

Agar15.0 g

NaCl5.0 g

Soytone5 g

위의 성분에 증류수를 가하여 950 mL로 만들고 가열 용해한 후 pH 7.3이 되도록 맞춘 다음 121℃로 15분간 고압증기 멸균한다. 고압멸균 시킨 배지를 약 50℃로 냉각시킨 후 양의 탈 섬유소 혈액을 5%(50 mL)가 되도록 첨가한 다음 사용한다.

80) Lowenstein-Jensen 사면배지

Asparagine3.6 g

Monopotassium Phosphate2.4 g

Magnesium Sulfate0.24 g

Magnesium Citrate0.6 g

Potato Flour30.0 g

Malachite Green0.4 g

위의 성분을 glycerol 12 mL을 함유한 증류수 600 mL에 가하여 배지가 끓기 직전까지 열을 가하면서 완전히 녹인 후 121℃에서 15분간 멸균한 후 50℃정도가 되도록 식힌다. 이 때 1,000 mL의 오염되지 않은 전란(whole egg)을 준비하여 거품이 생기지 않도록 잘 섞은 후 위의 배지에 거품이 생기지 않도록 잘 섞어준다. 뚜껑이 있는 튜브(screw-capped tube)에 섞은 배지를 분주한 후 사면배지가 되도록 잘 고정시켜 응고시킨 후 85℃에서 45분간 농축시킨다.

81) Middlebrook 7H10 한천배지

Ammonium Sulfate0.5 g

Monopotassium Phosphate1.5 g

Disodium Phosphate1.5 g

Sodium Citrate0.4 g

Magnesium Sulfate25.0 mg

Calcium Chloride0.5 mg

Zinc Sulfate1.0 mg

Copper Sulfate1.0 mg

L-Glutamic Acid (sodium salt)0.5 g

Ferric Ammonium Citrate0.04 g

Pyridoxine Hydrochloride1.0 mg

Biotin0.5 mg

Malachite Green250.0 μg

Agar15.0 g

* BBL Middlebrook OADC Enrichment

Sodium Chloride8.5 g

Dextrose20.0 g

Bovine Albumin (Fraction V)50.0 g

Catalase0.03 g

Oleic Acid0.6 mL

Middlebrook 7H10 powder 19 g에 증류수를 900 mL과 glycerol 5 mL을 가하고 잘 섞은 후 완전히 녹이기 위하여 1분간 끓인 다음 121℃에서 15분간 멸균한다. 50∼55℃까지 식힌 후 무균적으로 Middlebrook OADC Enrichment를 100 mL 섞는다.

82) Serum Dextrose 배지(Serum Dextrose broth)

Tryptose10 g

Beef extract3 g

NaCl5 g

증류수 950 mL을 가하고 121℃에서 15분간 멸균한 후 56℃에서 30분간 불활성화(inactivation)한 horse serum 과 dextrose 50 g을 첨가한다.

83) Serum Dextrose 한천배지(Serum Dextrose Agar)

Peptone10.0 g

Meat extract5.0 g

Sodium chloride5.0 g

Agar20.0 g

위의 성분에 증류수를 가하여 950 mL로 만들고 pH 7.4가 되도록 조정한 다음 121℃로 15분간 고압증기 멸균한 후 약 50℃의 항온수조에 보관한다. Fetal bovine serum 100 mL내에 Dextrose 20 g을 녹이고 여과하여 제조한 것 50 mL을 배지에 첨가한다. 일반세균의 증식을 억제하기 위하여 배지에 Bacitracin(25 units/mL), Vancomycin (20 ㎍/mL), Polymyxin B(5 units/mL, Nalidixic acid(5 ㎍/mL)과 Cycloheximide(100 ㎍/mL)을 첨가한다.

84) Brucella 한천배지(Brucella Agar)

Pancreatic Digest of Casein10.0 g

Peptic Digest of Animal Tissue10.0 g

Dextrose1.0 g

Yeast Extract2.0 g

Sodium Chloride5.0 g

Sodium Bisulfite0.1 g

Agar15.0 g

증류수를 1,000 mL 가하고, 완전히 녹이기 위해 1분간 가열한 뒤 121℃에서 15분간 멸균한 후 fibrin을 제거한 (비동화: 56℃, 30분 동안 가열) bovine serum을 5～10% 되도록 첨가한다.

85) Brucella 배지(Brucella broth)

Pancreatic Digest of Casein10.0 g

Peptic Digest of Animal Tissue10.0 g

Dextrose1.0 g

Yeast Extract2.0 g

Sodium Chloride5.0 g

Sodium Bisulfite0.1 g

증류수를 1,000 mL 가하고, 끓여서 녹인 뒤 121℃에서 15분간 멸균한 후 fibrin을 제거한 (비동화: 56℃, 30분동안 가열) bovine serum을 5～10% 되도록 첨가한다.

86) 피루베이트 고형배지(pyruvate-based solid medium)

Enzyme Digest of Casein3.6 g

Monopotassium Phosphate2.4 g

Magnesium Sulfate0.24 g

Magnesium Citrate0.6 g

Potato Flour30.0 g

Malachite Green0.4 g

위의 성분을 Sodium pyruvate 7.2 g을 함유한 증류수 600 mL에 가하여 배지가 끓기 직전까지 열을 가하면서 완전히 녹인 후 121℃에서 15분간 멸균한 후 50℃정도가 되도록 식힌다. 이 때 1,000 mL의 오염되지 않은 전란(whole egg)을 준비하여 거품이 생기지 않도록 잘 섞은 후 위의 배지에 거품이 생기지 않도록 잘 섞어준다. 뚜껑이 있는 튜브(screw-capped tube)에 섞은 배지를 분주한 후 사면배지가 되도록 잘 고정시켜 응고시킨 후 85℃에서 45분간 농축시킨다.

87) MRS 배지

Enzyme Digest of Casein10 g

Meat Extract10 g

Yeast Extract4 g

Glucose20 g

Tween 801.08 g

Triammonium Citrate2 g

Sodium Acetate5 g

Magnesium Sulfate 7H2O0.2 g

Manganese Sulfate 4H2O0.05 g

Dipotassium hydrogen Phosphate2 g

Agar15 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹이고 pH를 5.7±0.1로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

88) Tetrathionate 배지(Tetrathionate Broth)

(1) Tetrathionate broth base

Polypeptone5 g

Bile salts1 g

Calcium carbonate10 g

Sodium thiosulfate･5H2O30 g

Distilled water1 L

1,000 mL 멸균증류수에 배지성분을 부유시켜서 섞은 후 끓인다(배지성분이 침전되어 있으면 녹지 않는다). 최종 pH가 8.4±0.2가 되도록 한 뒤 45℃이하로 식혀서 5～8℃에 보관한다.

(2) Iodine-potassium iodide (I-KI) solution

Potassium iodide5 g

Iodine, resublimed6 g

Distilled water, sterile20 mL

5 mL의 멸균증류수에 Potassium iodide를 용해시킨 뒤 iodine을 첨가하고 완전히 녹인 후 증류수를 가하여 20 mL로 한다.

(3) Brilliant green solution

Brilliant green dye, sterile0.1 g

Distilled water, sterile100 mL

사용하려고 하는날, 20 mL의 I-KI 용액과 10 mL의 Brilliant green 용액을 Tetrathionate broth base에 첨가하고 서서히 교반하면서 배지침전물들을 재부유시킨 뒤 20×150 ㎜ 또는 16×150 ㎜의 멸균된 시험관에 무균적으로 10 mL씩 분주한다. 배지에 I-KI와 dye 용액을 첨가한 뒤에는 가열해서는 아니 된다.

89) RVS 배지(Rappaport-Vassiliadis soya peptone Broth)

Soya peptone4.5 g

Sodium Chloride7.2 g

Potassium Dihydrogen Phosphate1.26 g

Di-Potassium Dihydrogen Phosphate0.18 g

Magnesium Chloride, Anhydrous13.58 g

Malachite Green Oxalate0.036 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 5.6±0.2로 조정하고 잘 섞어 배지가 녹을 때까지 끓인 후 10 mL씩 분주하여 115℃에서 15분간 멸균한다.

90) BG Sulfa 한천배지(Brilliant Green Sulfa Agar)

Yeast extract3 g

Protease Peptone No.310 g

Lactose10 g

Saccharose10 g

Sodium Sulfapyridine1.0 g

Sodium chloride5.0 g

Agar20 g

Brilliant Green0.0125 g

Phenol Red0.08 g

위의 성분 59 g을 증류수 1,000 mL에 넣고 pH 6.9로 조정하고 분말이 완전히 용해 되도록 1분간 끓인다. 이 때 과도하게 가열하면 선택성이 떨어지므로 주의한다. 고압증기 멸균하여 사용한다.

91) HE 한천배지(Hektoen Enteric Agar)

Peptone12 g

Yeast extract3 g

Bile salts No. 39 g

Lactose12 g

Sucrose12 g

Salicin2 g

NaCl5 g

Sodium thiosulfate5 g

Ferric ammonium citrate1.5 g

Bromthymol blue0.065 g

Acid fuchsin0.1 g

Agar14.0 g

Distilled water1 L

가끔 교반시키면서 약 1분 동안 가열한 뒤 항온수조에서 냉각시킨다. 페트리접시(Petridish)에 20 mL씩 분주하고 뚜껑을 열고 2시간가량 굳힌다. 최종 pH는 7.6±0.2로 하고, 1일 이상 보관해서는 아니 된다.

92) XLT4 한천배지(XLT4 Agar)

Proteose Peptone No.31.6 g

Yeast Extract3.0 g

L-Lysine5.0 g

Xylose3.75 g

Lactose7.5 g

Saccharose7.5 g

Ferric Ammonium Citrate0.8 g

Sodium Thiosulfate6.8 g

Sodium Chloride5.0 g

Agar18.0 g

Phenol Red0.08 g

위의 성분 59 g을 증류수 1,000 mL에 넣고 여기에 4.6 mL XLT Agar supplement를 넣고 분말이 완전히 용해되도록 1분간 끓인다. 마지막 pH는 7.4±0.2로 맞추고 고압증기멸균은 하지 않는다.

93) LIA 사면배지(Lysine Iron Agar)

Peptone5.0 g

Yeast Extract3.0 g

Dextrose1.0 g

L-Lysine HCl10.0 g

Ferric Ammonium Citrate0.5 g

Sodium Thiosulfate0.04 g

Bromcresol Purple0.02 g

Agar15.0 g

위 성분을 증류수 1,000 mL에 녹인 후 pH 6.7±0.2로 조정하고 121℃, 12분간 멸균한다.

94) EC-MUG 배지

EC 배지 l,000 mL에 MUG(4-methylumbelliferyl-β-d-glucuronide) 50 ㎎을 첨가하여 시험관에 분주하여 121℃에서 15분간 멸균한다.

95) Lauryl Sulfate Tryptose (LST) Broth

Tryptose or trypticase20 g

Lactose5 g

K2HPO42.75 g

NaCl5 g

Sodium lauryl sulfate0.1 g

위의 성분을 증류수로 1,000 mL 되게 제조하여 pH 6.8로 조정한 다음 발효관(Duram tube)을 넣은 시험관에 10 mL씩 분주하고, 고압증기멸균한다. 필요에 따라 MUG 50 ㎎을 첨가하여 사용한다.(LST-MUG)

96) Violet Red Bile Agar(VRBA)

Yeast extract3.0 g

Peptone7.0 g

Lactose10.0 g

Bile salts No.31.5 g

Sodium chloride5.0 g

Neutral red0.03 g

Crystal violet0.002 g

Agar15.0 g

위의 성분에 증류수를 가하여 1,000mL로 만들고 pH 7.3～7.5가 되도록 맞춘 다음 2분간 끓여서 용해시켜 사용한다. 멸균은 하지 않는다.

97)ITC 배지(Irgasan, Ticarcillin
and potassium chlorate broth)

Enzymatic digest of casein10.0 g

Yeast extract1.0 g

Magnesium chloridehexahydrate(MgCl2.6H2O)60.0 g

Sodium Chloride5.0 g

Malachite green, 0.2% aqueous solution5.0 mL

위의 성분을 증류수 1000 mL에녹여 pH 6.9±0.2로 조정하고, 988 mL를 취하여 121℃에서 15분간 멸균하여 식힌 후, 다음의 Supplement들을 가한다.

Supplement: Ticarcillin solution 1 mL(Ticarcillin 10 mg을 증류수 10 mL에 녹여 여과멸균한 것), Irgasan solution 1 mL(Triclosan 10 mg을 95% Ethanol 10 mL에 녹인 것), Potassium chlorate solution 10 mL(Potassium chlorate 10 g을 증류수 100 mL에 녹여 여과 멸균한 것)

98)PEMBA한천배지(Polymyxin
pyruvate egg yolk mannitol bromothymol blue Agar)

Enzymatic digest of casein1.0 g

Mannitol10.0 g

Sodium Chloride2.0 g

Magnesium Sulfate0.1 g

Disodium hydrogen phosphate2.5 g

Potassium dihydrogen phosphate0.25 g

Sodium Pyruvate10.0 g

Bromothymol Blue0.12 g

Agar9∼18 g

위의 성분을 증류수 950 mL에 녹이고 pH 7.2 ± 0.2로 조정한후 121°C에서 15분간 멸균한다. 50°C로 식힌 다음 Polymyxin B 용액 100,000 IU와 난황액(시액 8) 50 mL를 각각 넣어 혼합한다.

99) CCI 한천배지(Chomogenic
Cronobacter Isolation agar

Tryptic digest of casein7.0 g

Yeast extract3.0 g

Sodium chloride5.0 g

5-bromo-4-chloro-3-indolyl-α-D-glucopyranoside0.15 g

Sodium desoxychloate0.25 g

Ammonium iron(Ⅲ) citrate1 g

Sodium thiosulfate1 g

Agar9∼18.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹이고 pH 7.3 ± 0.2로 조정한후 121°C에서 15분간 멸균한다.

100) ALOA 한천배지(Agar
Listeria according to Ottaviani and Agosti)

Enzymatic Digest of Animal Tissues18.0 g

Enzymatic Digest of Casein6.0 g

Yeast Extract10.0 g

Sodium Pyruvate2.0 g

Glucose2.0 g

Magnesium Glycerophosphate1.0 g

Magnesium Sulfate(anhydrous)0.5 g

Sodium Chloride5.0 g

Lithium Chloride10.0 g

Disodium Hydrogen Phophate(anhydrous)2.5 g

5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-glucopyranoside0.05 g

Agar12.0-18.0 g

위 성분을 증류수 930 mL에 녹이고 pH 7.2±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다. 50℃정도로 식히고 다음의 추가성분을 가한다. Supplement ①∼④는 여과 멸균하여 각 5 mL씩 가하고, Supplement ⑤는 121℃에서 15분간 멸균하여 50mL을 가한다.

ALOA agar Supplement: ① Nalidixic acid solution(0.02 g/5 mL), ② Ceftazidime solution(0.02 g/5 mL), ③ Polymyxin B solution(76700 IU/5 mL), ④ Cycloheximide solution(0.05 g/50% Ethanol 5 mL) ⑤ L-α-phosphatidylinositol solution(2 g/50 mL)

※ ④ Cycloheximide solution 대신 Amphotericin B solution(0.01 g/1M HCl 2.5 mL과 Dimethylformamide 7.5 mL 혼합용액)을 사용할 수 있다. 단, Amphotericin B solution을 사용할 경우 위의 배지 성분을 증류수 925 mL에 녹인다.

101) mCPC 한천배지(Modified Cellobiose- Polymyxin B-Colistin agar)

Peptone10.0 g

Beef extract5.0 g

Sodium chloride20.0 g

1000× Dye stock solution* 1.0 mL

Agar15.0 g

위 성분을 증류수 900 mL에 녹이고 pH 7.6으로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다. 50℃ 정도로 식히고 supplement 용액을 첨가한다.

※ mCPC agar supplement 용액: Cellobiose 10.0g을 증류수 100 mL에 천천히 가열하여 녹인후 식힌다. Polymyxin B 100,000 units과 Colistin 400,000 units을 가한다.

* 1000× Dye stock solution: Bromothymol blue 4.0 g과 Cresol red 4.0 g을 95% ethanol 100 mL에 녹여서 제조