4.5.2 총균수주로 원유 중 오염된 세균을 측정하기 위하여 일정량의 원유를 슬라이드그라스위에 일정면적으로 도말하고 건조시켜 염색한 후 현미경으로 검경하고 염색된 세균수를 측정한다. 측정된 세균수를 현미경 시야 면적과의 관계에 따라 검체 중에 존재하는 세균수를 측정하는 방법(직접현미경법: Breed method)이다.

가. 시험방법

채취된 시료를 약 30 ㎝ 진폭으로 7초에 25회 이상 흔들어 멸균 마이크로피펫으로 적량(100 μL)을 흡입하고 깨끗한 가아제로 피펫의 외벽에 부착된 시료를 잘 제거한 다음 슬라이드글라스 위에 적하한다. 도말침을 사용하여 1 ㎠ 면적에 고르게 도말하고 약 5분간 가온하여 건조시킨 다음, NewMan 염색액(시액 3)중에 순간적으로 적셔서 염색하고 남은 액을 즉시 흔들어 떨어뜨린 다음 건조시킨 후 물로 수세하여 다시 건조시킨다.

시료의 도말면적과 현미경의 시야면적과의 비, 즉 현미경 계수를 구한다. 유침렌즈를 사용하여 대물측미계로써 시야의 반경을 구하고 이 반경에 의하여 현미경시야의 면적을 구한다. 따라서 현미경 계수는 아래의 식에 의하여 구할 수 있다.

현미경계수 =	10,000(㎜2)
	r2× 3.1416

r : 시야의 반경(㎜)

이 현미경 계수에 100을 곱하면 시료 1 mL에 대한 실 현미경 계수가 된다. 이러한 현미경계수하에서 16개 이상의 대표적인 시야를 검경하고 이 평균치에 실 현미경계수를 곱하면 시료 1 mL 중의 총균수가 된다.