4.14.1 정성시험법

가. 증균배양

4.3 제조법에 따른 시험용액 1 mL를 Cooked Meat 배지(배지 33)의 아랫부분에 접종하여 35～37℃에서 18～24시간 동안 혐기배양한다. 시험용액을 가하지 아니한 동일 희석액 1 mL를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

나. 분리배양

카나마이신을 200 μg/mL의 농도로 가한 난황 첨가Clostridium perfringens한천배지(배지 27) 또는 난황첨가 TSC 한천배지(배지 41)에 증균배양액을 접종하여 35∼37℃에서 18～24시간 혐기배양 한 결과Clostridium perfringens한천배지에서 직경 2mm 정도의 약간 돌기된 유황색으로 주변에 불투명한 백색환이 있는 집락 또는 TSC 한천배지에서 불투명한 환을 가지는 황회색 집락은 확인시험을 실시한다.

다. 확인시험

분리배양된 평판배지상의 집락을 보통한천배지(배지 8)에 옮겨 35∼37℃에서 18～24시간 혐기배양한 후 그람염색을 실시한다. 또 동시에 보통한천배지를 35∼37℃에서 18～24시간 호기 배양하여 균의 비발육을 확인한다. 그람양성간균으로 확인된 집락은 glucose, lactose, inositol, raffinose를 1% 가한 4종의 GAM 배지(배지 34)에 옮겨 35∼37℃에서 3일간 배양 후 BTB-MR지시약(시액 4)을 가해서 붉은 색으로 변하는 것을 양성으로 판정한다. 운동성은 GAM 배지(배지 34)에서 35∼37℃에서 1～2일간 배양하여 운동성의 유무를 관찰한다. Glucose, lactose, inositol과 raffinose를 분해하며 운동성이 없는 것을 확인하면 Lecithinase 억제시험을 실시한다. 난황이 포함된 TSC한천배지(배지 41)에 접종하여 35∼37℃에서 24시간 혐기배양한 후 2～4 mm의 불투명한 환을 가지는 황회색 집락을 양성으로 판정한다.