4.19 캠필로박터 제주니/콜리(Campylobacter jejuni/coli)

가. 증균배양

1) 식품 및 식육: 검체 25 g(mL)를 Campylobacter supplement (A)(유가공품의 경우는 Campylobacter supplement(B))가 첨가된
HUNT(CEB) 배지(배지 47), Bolton 배지(배지 68) 또는 Preston 배지(배지 78) 100 mL에 넣고 균질화한 후 35∼37℃에서 4～5시간 동안 미호기적(5% O 2, 10% CO 2, 85% N 2)으로 1차 증균하고42±1℃ 에서44 ± 4시간 미호기적으로 2차 증균한다. 다만, HUNT 배지를 사용할 경우, 2차 증균시 일반식품은 Cefoperazone 용액(0.8 g/100 mL) 0.4 mL를 첨가하고 유제품은 Rifampicin용액(0.125 g/100 mL) 0.4 mL를 첨가하여 배양한다. 모든 시험에서는 시험용액을 가하지 아니한 동일 증균배지를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

2) 소, 돼지도체 : 제8. 일반시험법 5. 원유·식육·식용란의 시험법 5.2. 식육 시험법 5.2.3. 세균학적 시험법 가. 시료채취 및 방법 1) 도체 가)소 및 나)돼지의 시료채취 방법에 따라 멸균가아제나 스폰지로 시료를 채취한 후 멸균백에 넣고 25 mL BPW를 넣은 다음 균질화를 시킨 후 혈액을 첨가하지 않는 2XBolton 배지(2XBF-BEB) 25 mL를 넣고 미호기적 조건으로 42±1℃에서
48±2시간 배양한다. 시료를 채취하지 않은 동일 멸균가아제나 스폰지로 대조시험액을 제조하고 함께 시험하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

3) 닭, 오리도체 : 제8. 일반시험법 5. 원유·식육·식용란의 시험법 5.2. 식육 시험법 5.2.3. 세균학적 시험법 가. 시료채취 및 방법 1) 도체 다)닭의 시료채취방법에 따라 채취한 시료 30 mL에 혈액을 첨가하지 않는 2XBolton 배지(2XBF-BEB) 30 mL를 넣고 균질화 한 후 미호기적 조건에서 42±1℃
48±2시간 배양한다. 시료 채취 시 사용한 동일 BPW 또는 BPD를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

나. 분리배양

증균배양액을 modified Campy blood free 한천배지(배지 48) Abeyta-Hunt Blood 한천배지(배지 49), Preston 한천배지(배지 75), CCA 한천배지(배지 76) 또는 BCA 한천배지(배지 77)에 접종하여 42℃에서 24～48시간 미호기적으로 암소에서 배양한다.

다. 확인시험

Modified Campy blood free 한천배지상에서 원형 또는 불규칙한 형태로서 반투명한 흰색 또는 투명한 집락, Abeyta-Hunt Blood 한천배지(배지 49)상에서 무지개빛 광택 집락, CCA 및 BCA 한천배지에서는 불규칙한 가장자리를 가지고 점액이 있으며 회색인 평평한 집락(24～48시간 배양 후 용혈은 나타나지 않으며 분홍색이나 노란-회색집락이 나타나기도 한다), Preston 한천배지에서는 부드러운 모서리를 가진 불규칙한 원모양을 형성하는 반투명의 흰색집락(일부 균주는 황갈색 또는 약한 핑크색 집락을 형성)을 선별하여 혈액한천배지에 신속히 접종하여 42℃에서 24～48시간 배양한다. 배양된 집락을 취하여, 암시야 또는 위상차현미경으로 검경하거나 또는 대비 염색하여 지그재그 모양을 관찰한다. 이 때 대비염색은 10 mL식염수에 2방울의 crystal violet을 혼합한 용액을 이용한다. 현미경상으로 확인된 균에 대하여 catalase 및 oxidase 양성임을 확인한다. 확인된 균에 대하여, 캠필로박터 제주니는 hippurate 분해 양성, 황화수소 비생성, nalidixic acid 감수성, cephalothin 내성, 25℃에서 비생육, 42℃에서 생육 여부 등을 확인하며, 캠필로박터 콜리는 hippurate 분해 음성, nalidixic acid 감수성, cephalothin 내성, 25℃에서 비생육, 42℃에서 생육 여부 등 생화학시험을 실시한다.