4.21 크로노박터(Cronobacterspp.)

가. 증균배양

검체 5관에서 검체 각 60 g을 무균적으로 채취하여 540 mL의 멸균증류수에 가한 후35～37℃에서 18∼24시간 증균배양한다. 증균배양액 10 mL를 90 mL의 EE 배지(배지 59)에 첨가하여 35∼37℃에서 18∼24시간2차 증균 배양한다. 검체를 가하지 아니한 동일 멸균증류수를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

나. 분리배양

증균배양액을 CESA 한천배지(배지 60) 또는 E. sakazakii 한천배지(배지 62)에 도말하여 35∼37℃에서 24±2시간 배양하거나 CCI 한천배지(배지 99)에 도말하여 41.5±1℃에서 24±2시간 배양한다. 배양후 CESA 한천배지에서 청록색, E. sakazakii 한천배지에서는 장파장의 자외선(366nm) 조사하에 형광을 나타내는 전형적인 집락, CCI 한천배지(배지 99)에서 청록색 집락등 전형적인 집락들에 대하여 확인시험을 실시한다.

다. 확인시험

5개의 전형적인 집락을 취하여 Tryptic soy 한천배지(배지 40)에 옮겨25℃에서 48～ 72시간 배양한 후, 황색 집락을 선별하여 생화학적 시험을 실시한다. 해당 집락에 대한 생화학적 시험결과 Oxidase(-), L-Lysine decarboxylase(-), L-Ornithine decarboxylase(+), L-Arginine dihydrolase(+), sucrose(+), dulcitol(-), adonitol(-), raffinose(+), D-sorbitol(-), x-methyl-D-glucoside(+), D-arabitol(-)일 경우Cronobacterspp.양성으로 판정한다.