4.21 크로노박터(Cronobacter spp.)

가. 증균배양

검체 5관에서 검체 각 60 g을 무균적으로 채취하여 540 mL의 멸균증류수에 가한 후 35~37℃에서 18∼24시간 증균배양한다. 증균배양액 10 mL를 90 mL의 EE 배지(배지 59)에 첨가하여 35∼37℃에서 18∼24시간 2차 증균 배양한다. 검체를 가하지 아니한 동일 멸균증류수를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

나. 분리배양

증균배양액을 CESA 한천배지(배지 60) 또는 E. sakazakii 한천배지(배지 62)에 도말하여 35∼37℃에서 24±2시간 배양하거나 CCI 한천배지(배지 99)에 도말하여 41.5±1℃에서 24±2시간 배양한다. 배양후 CESA 한천배지에서 청록색, E. sakazakii 한천배지에서는 장파장의 자외선(366nm) 조사하에 형광을 나타내는 전형적인 집락, CCI 한천배지(배지 99)에서 청록색 집락 등 전형적인 집락들에 대하여 확인시험을 실시한다.

다. 확인시험

5개의 전형적인 집락을 취하여 Tryptic soy 한천배지(배지 40)에 옮겨 25℃에서 48～ 72시간 배양한 후, 황색 집락을 선별하여 생화학적 시험을 실시한다. 해당 집락에 대한 생화학적 시험결과 Oxidase(-), L-Lysine decarboxylase(-), L-Ornithine decarboxylase(+), L-Arginine dihydrolase(+), sucrose(+), dulcitol(-), adonitol(-), raffinose(+), D-sorbitol(-), x-methyl-D-glucoside(+), D-arabitol(-)일 경우 Cronobacter spp. 양성으로 판정한다.