7.1.2.3 다성분 시험법-제3법

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세토니트릴 또는 아세톤으로 추출한 다음, 기체크로마토그래프 분석농약은 플로리실 및 카본 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석하고 액체크로마토그래프 분석농약은 아미노프로필 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프 : 전자포획검출기(GC-ECD), 질소․인 검출기(GC-NPD) 또는 불꽃광도검출기(GC-FPD),
질량분석기(GC-MS 또는 GC-MS/MS)

2) 액체크로마토그래프：Post-column derivatization system, 형광검출기(
HPLC-FLD), 자외선흡광검출기(HPLC-UVD), 질량분석기(LC-MS 또는 LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 일회용 카트리지：
플로리실(Florisil, 1 g), 카본(Carbon, 500 mg) 및 아미노프로필 (Amino-propyl, 1 g) 등의 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 각 농약의 표준품을 유기용매에 녹여 표준원액으로 사용한다.

4) 표준용액: 표준원액을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출

가) 아세토니트릴 추출법시료를 정밀히 달아 추출용기에 넣고(곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 30 mL를 넣어 2시간 방치, 차의 경우 물 40 mL를 넣어 2시간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 2～3분간 강하게 흔들어 섞는다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압 여과한다. 여액을 염화나트륨 10～15 g이 들어있는 500 mL를 분액깔때기에 옮기고 마개를 막은 후 강하게 흔들고 정치하여 층을 분리시킨다. 아세토니트릴층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한 후 별도의 아세토니트릴을 넣어 최종 부피가 100 mL가 되게 한다. 아세토니트릴층 20 mL를 각각 취하고 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 날려버린다. ★ 잔류물을 기체크로마토그래프 분석 대상 농약의 경우 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL로 녹이고, 액체크로마토그래프 분석 대상 농약은 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL로 녹인다.

나) 아세톤 추출법시료를 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 30 mL를 넣어 2시간 방치, 차의 경우 물 40 mL를 넣어 2시간 방치) 아세톤 100 mL를 넣은 후 2～3분간 강하게 흔들어 섞는다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압 여과한다. 여과액을 1 L 분액깔때기로 옮기고 포화염화나트륨 용액 50 mL, 물 100 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 넣고 마개를 막은 후 강하게 흔들고 정치하여 층을 분리시킨 다음 디클로로메탄층을 취한다. 다시 디클로로메탄 50 mL로 상기의 과정을 되풀이 하여 여액을 합하고 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한 후 별도의 디클로로메탄을 넣어 최종 부피가 100 mL가 되게 한다. 디클로로메탄층 20 mL를 각각 취하고 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 날려버린다. ★ 잔류물을 기체크로마토그래프 분석 대상 농약의 경우 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL에 녹이고, 액체크로마토그래프 분석 대상 농약은 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL로 녹인다.※ 추출은 상기 가) 또는 나) 중 선택하여 사용함.주1) 용매추출액을 저온에서 정치하면 층분리가 빨라질 수 있음.주2) 곡류, 두류, 견과종실류 등 지방성 시료의 경우 ★까지 시험하고 잔류물에 미리아세토니트릴(또는 메탄올)로 포화시킨 헥산 30 mL를 건고물에 넣어 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴(또는 메탄올) 30 mL씩으로 2회 분배 추출하여 지방을 제거한다. 2회 추출된 아세토니트릴(또는 메탄올)층을 합친 후 40℃에서 감압 농축하고 잔류물을 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL(기체크로마토그래프 측정 농약) 및 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL(액체크로마토그래프 측정 농약)에 완전히 녹인다.

2) 정제

가) 기체크로마토그래프 측정 농약미리 플로리실 카트리지에 헥산 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 이 카트리지에 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 위와 같은 방법으로 유출시켜 버린다. 이어서 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초 정도의 속도로 용출하여 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 용출하여 동일 시험관에 모은다.이를 미리 헥산 5 mL와 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL로 활성화시킨 카본 카트리지에 용출액을 넣고1～2 방울/초정도의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 추가로 20% 아세톤 함유 헥산 15 mL로 용출시켜 동일 시험관에 모은다. 용출액은 40℃ 이하에서 질소 또는 공기를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 20% 아세톤함유 헥산에 녹여서 일정량으로 한 후 멤브레인 필터(PTFE 0.45 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.(단, 카본 카트리지는 색소 등 방해물질 제거에 필요시에 사용한다.)주3) 정제과정 중에는 모든 카트리지의 충전제가 마르지 않도록 주의한다.주4) 기체크로마토그래프 측정 농약을 전처리할 때 항상 감압농축하기 전에 2% 디에틸글리콜(Diethyl glycol) 함유 아세톤 0.2 mL를 첨가한다.

나) 액체크로마토그래프 측정 농약미리 아미노프로필 카트리지에 디클로로메탄 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 이어서 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 7 mL를 용출하여 동일 시험관에 합친다. 용출액은 40℃ 이하에서 질소 또는 공기를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 아세토니트릴에 녹여 일정량으로 한 후멤브레인 필터(PTFE 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.(단, 카본 카트리지는 색소 등 방해물질제거에 필요시에 사용한다.).

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 분석조건

가) GC-ECD, GC-NPD

(1) 컬럼：DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 및 DB-17(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유속：질소(N
2) 또는 헬륨(He), 1.0 mL/분

(3) 오븐 온도：80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/분의 비율로 250℃까지 온도를 상승시키고 5℃/분의 비율로 280℃까지 상승시켜 20분 이상 유지한다.

(4) 주입부：split mode(20 : 1)

(5) 검출기 온도：280℃

나) GC-FPD

(1) 컬럼：DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 및 DB-17(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유속：질소(N
2) 또는 헬륨(He), 1.0 mL/분

(3) 오븐 온도：80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/분의 비율로 250℃까지 온도를 상승시키고 5℃/분의 비율로 280℃까지 상승시켜 20분 이상 유지한다.

(4) 주입부：splitless mode

(5) 검출기 온도：280℃

2) 기체크로마토그래프 분석 대상(206 성분)

1	Acrinathrin(ECD)	2	Aldrin(ECD)	3	Ametryn(NPD)
4	Anilofos(NPD,ECD)	5	Atrazine(NPD)	6	Azaconazole(NPD)
7	Azinphos-ethyl(FPD)	8	Azinphos-methyl(ECD,NPD)*	9	α-BHC(ECD)
10	β-BHC(ECD)	11	γ-BHC(ECD)	12	δ-BHC(ECD)
13	Bifenthrin(ECD)	14	Binapacryl(ECD)	15	Bromacil(ECD)
16	Bromobutide(NPD)	17	Bromophos-methyl(FPD)	18	Bromopropylate(ECD)
19	Bromoxynil(ECD)	20	Bupirimate(NPD)	21	Butafenacil(ECD)
22	Cadusafos(NPD,FPD)	23	Captafol(ECD)*	24	Captan(ECD)*
25	Carbophenothion(ECD,NPD)	26	Chinomethionat(ECD,NPD)	27	Chlordane(ECD)
28	Chlorfenapyr(NPD,FPD)	29	Chloridazon(ECD)	30	Chlorobenzilate(ECD)
31	Chlorothalonil(ECD)	32	Chlorpyrifos(ECD,NPD)	33	Chlorpyrifos-methyl(ECD,NPD)
34	Chlorthal-dimethyl(ECD)	35	Clomeprop(ECD)	36	Cyanazine(ECD)
37	Cyanophos(NPD)	38	Cyflufenamid(ECD)*	39	Cyfluthrin(ECD)*
40	Cyhalothrin(ECD)*	41	Cypermethrin(ECD)*	42	Cyproconazole(NPD)
43	Cyprodinil(NPD)*	44	p,p-DDD(ECD)	45	p,p-DDE(ECD)
46	o,p-DDT(ECD)	47	p,p-DDT(ECD)	48	Deltamethrin(ECD)*
49	Diazinon(ECD,NPD)	50	Dichlofluanid(ECD,NPD)***	51	Dichlorvos(NPD,FPD)*
52	Dicloran(ECD)	53	Dicofol(ECD)	54	Dieldrin(ECD)*
55	Diethofencarb(NPD)	56	Diflufenican(ECD)	57	Dimepiperate(ECD,NPD,FPD)
58	Dimethachlor(ECD)	59	Dimethenamid(NPD,ECD)	60	Dimethoate(ECD,NPD)
61	Dimethylvinphos(NPD,FPD,ECD)	62	Diniconazole(ECD)	63	Diphenamid(NPD)
64	Diphenylamine(NPD)	65	Dithiopyr(ECD)	66	Edifenphos(ECD,NPD)
67	α-Endosulfan(ECD)	68	β-Endosulfan(ECD)	69	Endosulfan-sulfate(ECD)
70	Endrin(ECD)	71	EPN(ECD, NPD)	72	Esprocarb(ECD,NPD)
73	Ethion(ECD,NPD)	74	Ethoprophos(ECD,NPD)	75	Etoxazole(NPD)
76	Etrimfos(ECD,NPD)	77	Fenamidone(ECD,NPD)	78	Fenarimol(ECD,NPD)*
79	Fenazaquin(NPD,FPD)*	80	Fenbuconazole(ECD,NPD)*	81	Fenitrothion(ECD,NPD)
82	Fenobucarb(NPD)	83	Fenothiocarb(NPD)*	84	Fenoxanil(ECD,NPD)
85	Fenoxycarb(NPD)	86	Fenpropathrin(ECD,NPD)**	87	Fenthion(ECD,NPD)*
88	Fenvalerate(ECD)*	89	Fipronil(NPD,FPD,ECD)	90	Flonicamid(ECD)*
91	Fluacrypyrim(ECD)	92	Fludioxonil(NPD)	93	Flufenacet(ECD)
94	Flufenoxuron(NPD)	95	Flumiclorac-pentyl(ECD)	96	Fluquinconazole(ECD)
97	Flusilazole(NPD)	98	Fluthiacet-methyl(ECD)	99	Flutolanil(ECD,NPD)
100	Fluvalinate(ECD)*	101	Folpet(ECD)*	102	Fonofos(NPD)
103	Fosthiazate(NPD,FPD)	104	Fthalide(ECD)	105	Furathiocarb(NPD)
106	Heptachlor(ECD)	107	Heptachlor epoxide(ECD)	108	Hexachlorobenzene(ECD)
109	Hexaflumuron(ECD)	110	Imazalil(ECD)*	111	Imibenconazole(NPD)
112	Indanofan(ECD)	113	Indoxacarb(ECD)	114	Iprobenfos(NPD,FPD)
115	Iprodione(ECD)	116	Iprovalicarb(ECD)	117	Isofenphos(NPD)
118	Isofenphos-methyl(NPD)*	119	Isoprothiolane(ECD)	120	Isoxathion(NPD)
121	Kresoxim-methyl(NPD)	122	Lactofen(ECD)	123	Lufenuron(ECD)
124	Malathion(ECD,NPD)	125	Mecarbam(ECD,NPD)	126	Mefenacet(ECD)
127	Mefenpyr-diethyl(ECD)	128	Mepronil(NPD)	129	Metconazole(NPD)
130	Methabenzthiazuron(NPD)	131	Methidathion(ECD,NPD)	132	Methoxychlor(ECD)
133	Metrafenone(ECD)	134	Molinate(NPD)	135	Myclobutanil(ECD,NPD)*
136	Nitrapyrin(ECD)	137	Nitrothal-isopropyl(ECD)	138	Nonachlor(ECD)
139	Novaluron(ECD)	140	Nuarimol(ECD)*	141	Ofurace(ECD)
142	Oxadixyl(ECD,NPD)	143	Oxydemeton-methyl(FPD)	144	Paclobutrazol(ECD,NPD)*
145	Parathion(ECD,NPD)	146	Parathion-methyl(ECD,NPD)	147	Penconazole(ECD,NPD)
148	Pencycuron(NPD)	149	Pendimethalin(ECD,NPD)	150	Permethrin(ECD)**
151	Phenthoate(ECD,NPD)	152	Phosalone(ECD,NPD)	153	Phosmet(ECD,NPD)
154	Phosphamidone(ECD,NPD)	155	Picolinafen(ECD)	156	Picoxystrobin(ECD)
157	Piperophos(NPD,FPD)	158	Pirimicarb(NPD)	159	Pirimiphos-ethyl(NPD)
160	Pirimiphos-methyl(NPD)	161	Probenazole(ECD)	162	Prochloraz(ECD)
163	Procymidone(ECD,NPD)	164	Profenofos(ECD,NPD)	165	Propazine(NPD)
166	Propisochlor(ECD,NPD)	167	Propoxur(NPD)	168	Propyzamide(ECD)
169	Prothiofos(NPD)	170	Pyraclofos(NPD)	171	Pyrazophos(ECD,NPD)
172	Pyridaben(NPD,ECD)*	173	Pyridalyl(ECD,NPD,FPD)	174	Pyrimethanil(NPD)
175	Pyrimidifen(ECD)	176	Pyriminobac-methyl(NPD)	177	Quinalphos(NPD)
178	Quintozene(ECD)	179	Simeconazole(NPD)	180	Sulprofos(FPD)
181	TCMTB(ECD)	182	Tebuconazole(NPD)*	183	Tebufenpyrad(NPD)*
184	Tebupirimfos(ECD,NPD, FPD)	185	Teflubenzuron(ECD)	186	Tefluthrin(ECD)
187	Terbufos(NPD)*	188	Terbutylazine(ECD,NPD)	189	Tetrachlorvinphos(FPD)
190	Tetradifon(ECD)	191	Thiazopyr(ECD,NPD)	192	Thifluzamide(ECD,NPD)
193	Thiometon(ECD,NPD)	194	Tolclofos-methyl(ECD,NPD)	195	Tolfenpyrad(NPD)
196	Tolylfluanid(ECD,NPD)	197	Tralomethrin(ECD,NPD)	198	Triadimefon(ECD,NPD)
199	Triazophos(NPD)	200	Tribufos(FPD)	201	Triflumizole(ECD,NPD)
202	Triflumuron(ECD)	203	Uniconazole(ECD)	204	Vernolate(ECD)
205	Vinclozoline(ECD,NPD)	206	Zoxamide(ECD,NPD)

3) 액체크로마토그래프의 분석조건

가) HPLC-FLD(Post-derivatization 포함)

(1) 컬럼：C
18(3.9 mm × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 검출파장：Excitation 340 nm, Emission 455 nm

(3) 이동상：물과 메탄올

- 메탄올：물(3：7)의 혼합액에서 메탄올：물(7：3)의 혼합액으로 23분간 농도균배한 후 5분 이상 흘려보낸다.

(4) 이동상 유속：0.8 mL/분

(5) Post Reaction Pump 유속：0.5 mL/분(NaOH 0.25 mL/분, OPA 0.25 mL/분) 또는 기타 최적조건

나) HPLC-UVD

(1) 컬럼：C
18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 등등한 것

(2) 검출파장：254 nm

(3) 이동상：물과 아세토니트릴

- 아세토니트릴:물 혼합액(20 : 80)에서 (80 : 20)의 혼합액으로 40분간 농도균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.

-메탄올:물(35 : 65)에서 (90 : 10)의 혼합액으로 40분간 농도균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.※ 이동상의 조건은 상기 두 가지 중 선택하여 사용함

(4) 이동상 유속：1.0 mL/분

4)

1	Acetamiprid(UVD)*	2	Aldicarb(FLD)	3	Amisulbrom(UVD)
4	Azoxystrobin(UVD)	5	Bendiocarb(FLD)	6	Benzoximate(UVD)*
7	Boscalid(UVD)	8	Bromoxynil(UVD)	9	Butocarboxim(FLD)
10	Carbaryl(FLD)	11	Carbofuran(FLD)	12	Chlorantraniliprole(UVD)
13	Chlorimuron-ethyl(UVD)	14	Chlorobenzuron(UVD)	15	Chlorotoluron(UVD)
16	Chromafenozide(UVD)	17	Cinosulfuron(UVD)	18	Clothianidin(UVD)*
19	Cyazofamid(UVD)	20	Cymoxanil(UVD)	21	Dimethomorph(UVD)
22	Ethaboxam(UVD)	23	Ethametsulfuron-methyl(UVD)	24	Ethiofencarb(FLD)
25	Fenhexamid(UVD)	26	Fenpyroximate(UVD)*	27	Ferimzone(UVD)
28	Fluacrypyrim(UVD)	29	Flubendiamide(UVD)	30	Flufenacet(UVD)
31	Flufenoxuron(UVD)	32	Fluquinconazole(UVD)	33	Flusulfamide(UVD)
34	Forchlorfenuron(UVD)	35	Hexaflumuron(UVD)	36	Imazamox(UVD)
37	Imazapic(UVD)	38	Imazaquin(UVD)	39	Imazethapyr(UVD)
40	Imibenconazole(UVD)	41	Iprovalicarb(UVD)	42	Isoprocarb(FLD)
43	Isoproturon(UVD)	44	Lufenuron(UVD)	45	Mepanipyrim(NPD, UVD)
46	Metamifop(UVD)	47	Methabenzthiazuron(UVD)	48	Methiocarb(FLD)
49	Methomyl(FLD)*	50	Methoxyfenozide(UVD)	51	Metolcarb(FLD)
52	Nitenpyram(UVD)	53	Novaluron(UVD)	54	Oxamyl(FLD)*
55	Oxaziclomefon(UVD)	56	Phenmedipham(UVD)	57	Pirimicarb(FLD)
58	Promecarb(FLD)	59	Propoxur(FLD)	60	Pyraclostrobin(UVD)
61	Pyrazolate(UVD)	62	Pyribenzoxim(UVD)	63	Pyributicarb(UVD)
64	Pyridate(UVD)	65	Pyrimethanil(UVD)	66	Pyriproxyfen(UVD)
67	Pyroquilon(UVD)	68	Quinoclamine(UVD)	69	Rimsulfuron(UVD)
70	Spirodiclofen(UVD)	71	Tebufenozide(UVD)	72	Teflubenzuron(UVD)
73	Thenychlor(UVD)	74	Thiacloprid(UVD)*	75	Thiamethoxam(UVD)*
76	Thiodicarb(FLD)	77	Tiadinil(UVD)	78	Tribenuron-methyl(UVD)
79	Tricyclazole(NPD, UVD)	80	Trifloxystrobin(ECD, UVD)	81	2,3,5-Trimethacarb(FLD)
82	3,4,5-Trimethacarb(FLD)

액체크로마토그래프 분석 대상(82 성분)

사. 정성시험위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 어느 분석조건에서도 표준품과 일치하여야 한다.GC-MS(MS/MS 포함) 및 LC-MS(MS/MS 포함)상의 머무름시간(retention time) 및 질량분석 스펙트럼으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

아. 정량시험

1) 정량시험은 단일 표준품으로 표준용액을 일정농도로 제조한 후 검량선을 작성하여 위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

2) ‘바. 시험조작’의 분석대상 농약 중 * 표시된 농약의 정량시험은 다음을 따른다.

가) ‘*’ 표시된 농약이 식품에서 검출될 경우7.1.2.2, 7.1.2.4, 7.1.2.16, 7.1.2.20 시험법으로 정량한다.

나) ‘**’ 표시된 농약(Fenpropathrin, Permethrin)이 검출될 경우 7.1.2.4 시험법으로 정량한다.

다) ‘***’ 표시된 농약Dichlofluanid가 검출된 경우7.1.3.1 시험법으로 정량한다.