7.1.2.12 엠시피비(MCPB) 및 트리클로피르(Triclopyr)

가. 시험법 적용범위곡류, 두류, 과일류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세톤으로 추출한 후 가수분해, 유도체화 과정을 거쳐 플로리실 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 측정한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3)표준원액 : 엠시피비 및 트리클로피르 표준품을 각각 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 각각의 표준원액 1 mL를 취하여 플라스크에 넣고 실온에서 질소가스를 사용하여 증발건고 시킨 후 ‘마. 시험용액의 조제 3) 유도체화’에 따라 실험하고 헥산으로 적절한 농도로 희석하여 사용한다.

5) 플로리실 카트리지(Florisil cartridge) : SPE용 또는 이와 동등한 것

6) 유도체화 시약 : pentafluorobenzylbromide/acetone 용액

7) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고 이에 6 M HCl 10 mL 및 아세톤 100 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞어 추출하고 이를 부흐너깔때기로 흡인 여과한다. 잔류물은 아세톤 50 mL로 씻고 씻은 액은 위의 여과액에 합한 다음 40℃ 이하에서 감압 농축하여 약 60 mL로 농축한다. 농축액에 5% 염화나트륨용액 100 mL 및 에틸에테르 100 mL를 넣어 분액깔때기(1)에 옮겨 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리하고 물층을 분액깔때기(2)에 옮긴다. 다시 물층(분액깔때기 2)에 에테르 100 mL씩으로 위와 같이 2회 되풀이한 후 에테르층을 합하고 이에 헥산 100 mL를 넣고 흔들어 섞어서 씻고 에테르층을 무수황산나트륨으로 탈수, 여과한 후 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 완전히 날려 버리고 잔류물을 헥산 30 mL에 녹여 분액깔때기에 옮긴다. 이에 헥산포화아세토니트릴용액 30 mL를 가해 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 아세토니트릴층을 감압농축기용 플라스크에 옮긴다. 다시 헥산층에 헥산포화아세토니트릴용액 30 mL를 넣고 위와 같이 되풀이한 후 아세토니트릴층을 위의 플라스크에 합하여 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 완전히 날려 버리고 잔류물을 메탄올 25 mL에 녹인다.

2) 가수분해
위의 메탄올 25 mL에 1 M 수산화나트륨용액 25 mL를 넣고 환류냉각관를 부착하여 80℃에서 30분간 가열하여 가수분해시킨 후 5% 염화나트륨용액 100 mL 및 에틸에테르 100 mL를 넣고 분액깔때기로 옮겨 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨다. 물층을 취하여 6 M 염산용액으로 pH를 1로 조정하여 분액깔때기로 옮긴다. 이에 에틸에테르 100 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 에틸에테르층을 무수황산나트륨으로 탈수, 여과하여 감압농축기용 플라스크에 넣는다. 다시 물층에 에틸에테르 100 mL씩으로 위와 같이 2회 되풀이한 후 에틸에테르층을 위의 플라스크에 합하고 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 완전히 날려 버리고 잔류물을 아세톤 10 mL에 녹인다.

3) 유도체화
위의 아세톤 10 mL에 30% 탄산칼륨용액 0.1 mL 및 1% pentafluorobenzylbromide/ acetone용액 1 mL를 넣어 밀폐시켜 50℃에서 1시간 가열한 후 이에 5% 염화나트륨용액 50 mL 및 헥산 50 mL를 넣고 분액깔때기로 옮겨 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리하고 헥산층을 감압농축기용 플라스크에 옮긴다. 다시 물층에 헥산 50 mL를 넣고 위와 같이 되풀이한 후 헥산층을 위의 플라스크에 합하고 무수황산나트륨으로 탈수, 여과하여 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 날려 버리고 잔류물을 헥산 5 mL에 녹인다.

4) 정제
미리 헥산으로 활성화한 플로리실 카트리지에 위의 액을 넣어 유출시켜 버리고 다시 에틸아세테이트 : 헥산(10 : 90) 혼합액 50 mL를 넣고 유출시켜 버린다. 이어서 에틸아세테이트 : 헥산(30 : 70) 혼합액 100 mL를 넣어 용출하여 받고 용출액을 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 완전히 날려 버리고 잔류물을 헥산 일정량에 녹여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼 : 안지름 0.53 mm, 길이 50 m의 기체크로마토그래프용 모세관 유리 컬럼에 메틸실리콘을 1.0 μm의 두께로 코팅한 것 또는 이와 동등한 것

나) 주입구 및 검출기 온도 : 250℃, 280℃

다) 오븐 온도 : 초기온도 60℃에서 시험용액을 주입한 후 1분간 유지하고 20℃/분의 비율로 온도를 상승시켜 250℃에서 일정시간 유지한다.

라) 이동상가스 및 유속 : 질소(N2)를 적절하게 조절한다.

2) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

사. 정성시험위의 조건으로 얻어진 크로마토그램 상의 피크는 어느 분석조건에서도 표준용액 피크의 머무름 시간(retention time)과 일치하여야 한다.

아. 정량시험정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.