7.1.2.16 클로로탈로닐(Chlorothalonil), 캡탄(Captan), 폴펫(Folpet) 및 캡타폴(Captafol)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세톤 및 3% 인산용액으로 추출한 후 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 클로로탈로닐, 캡탄, 폴펫 및 캡타폴 표준품을 각각 헥산에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) 플로리실(Florisil) : 컬럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

6) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 25 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류, 두류 등 건조 시료는 물 20 mL를 넣고 30분간 방치) 아세톤 100 mL와 3% 인산용액 5 mL를 넣어 2분간 흔들어 섞어 추출한 다음 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과한다. 잔류물을 아세톤 40 mL로 씻어 내려 앞의 여과액과 합친 후 40℃ 이하에서 감압 농축한다. 수기에 아세톤 10 mL를 넣고 녹여 분액깔때기에 옮기고 물 450 mL와 포화염화나트륨용액 50 mL, 디클로로메탄 50 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들고 정치하여 층을 분리시킨 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시키는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하고, 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 40 mL로 녹여 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮긴다. 헥산포화아세토니트릴 40 mL를 분액깔때기에 넣어 5분간 강하게 흔들고 정치하여 층을 분리시킨 후, 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하고, 잔류물을 디클로로메탄 : 헥산(20 : 80) 혼합액 10 mL로 녹인다.

2) 정제
안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리컬럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨 약 2 g을 차례로 충전한 후 헥산 50 mL를 넣어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 : 헥산(20 : 80) 혼합액 10 mL를 넣어 약 3 mL/분의 유속으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄 : 헥산(20 : 80) 혼합액 100 mL를 넣어 유출시켜 버리고, 디클로로메탄 : 헥산 : 아세토니트릴(50 : 48.5 : 1.5) 혼합액 150 mL로 용출하여 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축한 후, 잔류물을 헥산 10 mL로 녹인다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼 : DB-1(30 m × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유속 : 질소(N2), 15 mL/분

다) 주입부 온도 : 250℃

라) 오븐 온도 : 160℃(Chlorotalonil, Captan, Folpet), 200℃(Captafol)

마) 검출기 온도 : 300℃

바) 주입모드 : 직접주입

사) 주입량 : 2 μL

2) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.

1 : 클로로탈로닐(5.8분), 2 : 캡탄(13.5분), 3 : 폴펫(14.4분), 4 : 캡타폴(9.3분)

4) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 클로로탈로닐, 캡탄, 폴펫 및 캡타폴을 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 분석조건

가) 컬럼 : DB-1MS(50 m × 0.25 mm, 0.32 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유속 : 질소(N2), 1 mL/분

다) 주입부 온도 : 260℃

라) 오븐 온도 : 240℃

마) 주입모드 : Split mode(30 : 1)

바) 주입량 : 1 μL

사) 분자량 범위 : 50～500m/z

아) 기체크로마토그래프-질량분석기의 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	이온 (m/z)
클로로탈로닐 (Chlorothalonil)	6.0	265.9	109, 266
캡탄 (Captan)	10.2	300.6	79, 149, 301
폴펫 (Folpet)	10.6	296.6	76, 104, 260, 295
캡타폴 (Captafol)	12.8	349.1	79, 151, 347