7.1.2.18 비페닐(Biphenyl), 클로퀸토셋멕실(Cloquintocet-mexyl), 디클로사이메트(Diclocymet), 노나클로르(Nonachlor)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세토니트릴로 추출한 후 활성탄/아미노프로필 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프-질량분석기 및 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 비페닐, 클로퀸토셋멕실, 디클로사이메트, 및 노나클로르 표준품을 각각 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 아세톤에 녹여 각각 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) C18카트리지 : C 18(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 활성탄/아미노프로필 카트리지(Amino-propyl cartridge) : 활성탄(0.5 g)과 아미노프로필(0.5 g)이 2층으로 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

7) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 50 g(차는 분말 시료 10 g)을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류, 두류, 견과종실류는 물 30 mL, 차는 물 40 mL를 넣고 2시간 동안 방치) 아세토니트릴 100 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들어 섞어 추출하고 여과지(공극 10 μm 이하)가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인 여과한다. 미리 염화나트륨 10～15 g이 들어있는 150 mL 용량의 분액깔때기에 옮겨 1분간 강하게 흔들고 정치하여 층을 분리시킨 후, 아세토니트릴층 중 20 mL를 정확히 취하여 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소가스를 사용하여 서서히 증발, 건고한 후 잔류물을 아세토니트릴 : 톨루엔(75 : 25) 혼합액 2 mL에 녹인다. ※ 지방성 시료의 경우 아세토니트릴층 중 20 mL를 정확히 취하고 40℃ 이하에서 약 10 mL가 남을 때까지 감압 농축하여 다음의 유지 제거과정을 추가로 수행한다. C 18카트리지에 아세토니트릴 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세토니트릴 용액 10 mL를 고정상 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출하여 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 다시 아세토니트릴 10 mL를 용출하여 앞의 용출액과 합한다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소가스를 사용하여 서서히 증발, 건고한 후 잔류물을 아세토니트릴 : 톨루엔(75 : 25) 혼합액 2 mL로 녹인다.

2) 정제
활성탄/아미노프로필 카트리지에 아세토니트릴 : 톨루엔(75 : 25) 혼합액 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 아세토니트릴 : 톨루엔(75 : 25) 혼합액 2 mL를 고정상 상단에 넣어 1～2 방울/초의 속도로 용출하여 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 다시 아세토니트릴 : 톨루엔(75 : 25) 혼합액 15 mL를 용출하여 앞의 용출액과 합한다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소 가스를 사용하여 서서히 증발, 건고한다. 시료별 최종 잔류물을 기체크로마토그래프 분석 대상 농약의 경우 아세톤 10 mL로 녹이고, 액체크로마토그래프 분석 대상 농약은 메탄올 10 mL로 녹인다.

3) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.

1 : 비페닐(9.9분), 2 : 디클로사이메트(17.5, 17.8분), 3 : 노나클로르(18.2, 19.3분)

그림 2. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.

클로퀸토셋멕실(18.9분)

5) 정량한계
비페닐, 디클로사이메트, 노나클로르 : 0.025 mg/kg 클로퀸토셋멕실 : 0.02 mg/kg

바. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

사. 확인시험기체/액체 크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 비페닐, 클로퀸토셋멕실, 디클로사이메트, 및 노나클로르를 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 분석조건

가) 컬럼 : DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및유속:헬륨(He), 1 mL/분

다) 주입부 온도 : 260℃

라)오븐 온도: 80℃에서 2분간 유지하고 280℃까지 10℃/분의 비율로 온도를 상승시켜 15분 이상 유지한다.

마) 인터페이스 온도 : 280℃

바) 주입모드 : Splitless mode

사) 주입량 : 1 μL

아) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	이온 (m/z)
비페닐 (Biphenyl)	9.9	154.2	154, 153
디클로사이메트 (Diclocymet)	17.5, 17.8	313.2	277, 221, 173
노나클로르 (Nonachlor)	18.2, 19.3	444.2	409, 411, 407

2) 액체크로마토그래프-질량분석기의 분석조건

가) 컬럼 : C18(2.1 mm × 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 : 5 mM 아세트산암모늄 함유 메탄올과 5 mM 아세트산암모늄수용액의 혼합비를 35 : 65로 2분간 유지 후 55 : 45로 6분간 직선적으로 농도 구배한 후 재차 95 : 5로 10분간 직선적으로 농도 구배한 후 10분간 유지한다.

다) 이동상 유속 : 0.2 mL/분

라) 컬럼 온도 : 40℃

마) 주입량 : 5 μL

바) 이온화 : ESI positive-ion mode

사) Cone voltage : 30 V

아) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	이온 (m/z)
클로퀸토셋멕실 (Cloquintocet-mexyl)	18.9	335.8	336, 238