7.1.2.19 클로메프로프에시드(Clomeprop acid), 클로프로프(Cloprop), 클로퀸토셋(Cloquintocet), 클로란슐람메틸(Cloransulam-methyl), 사이클라닐리드(Cyclanilide), 플로라슐람(Florasulam), 플루멧슐람(Flumetsulam), 플루미클로락(Flumiclorac), 아이옥시닐(Ioxynil), 아이소카바미드(Isocarbamid), 메펜피르(Mefenpyr), 초산나프탈렌(1-Naphthylacetic acid), 트랄콕시딤(Tralkoxydim)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세토니트릴로 추출한 후 실리카겔 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 클로메프로프에시드(Clomeprop free acid), 클로퀸토셋(Cloquintocet), 클로란슐람메틸, 사이클라닐리드, 플로라슐람, 플루멧슐람, 플루미클로락(Flumiclorac), 아이옥시닐(Ioxynil), 아이소카바미드, 메펜피르(Mefenpyr diethyl), 초산나프탈렌 및 트랄콕시딤 표준품을 각각 메탄올에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 메탄올에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5)C18카트리지: C18(1 g)이 충전되어 있는 1회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 실리카겔 카트리지(silicagel cartridge) : 실리카겔(0.5 g)이 충전되어 있는 1회용 카트리지(용량 3 mL) 또는 이와 동등한 것

7) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 50 g(차는 분말 시료 10 g)을 정밀히 달아 500 mL 용량의 삼각플라스크에 넣고(곡류, 두류, 견과종실류 등 건조 시료는 물 30 mL, 차는 물 40 mL를 넣고 2시간 동안 방치) 0.01 M 염산수용액 20 mL와 아세토니트릴 100 mL를 넣어 20분간 강하게 흔들어 섞어 추출한 후 여과지(공극 10 μm 이하)가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인 여과한다. 여과액 중 수분에 충분히 포화되도록 염화나트륨 50 g이 들어있는 150 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 강하게 흔들어 정치하여 층을 분리시킨다. 아세토니트릴층 중 20 mL를 정확히 취하여 40℃ 이하에서 약 12 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 잔류물을 아세톤 : 트리에틸아민 : 헥산(20 : 0.5 : 80) 혼합액 2 mL로 녹인다. ※ 지방성 시료의 경우 아세토니트릴층 중 20 mL를 정확히 취하고 40℃ 이하에서 약 10 mL가 남을 때까지 감압 농축하여 다음의 유지 제거과정을 추가로 수행한다. 즉, C 18카트리지에 아세토니트릴 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세토니트릴 추출액 10 mL를 넣어 1～2 방울/초의 속도로 용출하여 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 다시 아세토니트릴 20 mL(클로프로프 및 플루미클로락 분석 시에는 5 mL)를 용출하여 앞의 용출액과 합친다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소가스를 사용하여 서서히 증발, 건고한 후 잔류물을 아세톤 : 트리에틸아민 : 헥산(20 : 0.5 : 80) 혼합액 2 mL로 녹인다.

2) 정제

가) 클로메프로프에시드, 클로프로프 및 플루미클로락실리카겔 카트리지에 메탄올 5 mL, 아세톤 5 mL 및 헥산 20 mL를 2～3 방울/초의 속도로 순차적으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 추출액 2 mL를 카트리지에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 버린 후 다시 아세톤 : 트리에틸아민 : 헥산(20 : 0.5 : 80) 혼합액 10 mL를 유출시켜 버리고 아세톤 : 메탄올(50 : 50) 혼합액 12 mL를 용출하여 시험관에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소가스를 사용하여 서서히 증발, 건고한 후 메탄올 5 mL를 넣어 녹인다.

나) 클로퀸토셋 및 메펜피르실리카겔 카트리지에 메탄올 5 mL, 아세톤 5 mL 및 헥산 20 mL를 2～3 방울/초의 속도로 순차적으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 추출액 2 mL를 카트리지에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출하여 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 다시 아세톤 : 트리에틸아민 : 헥산(20 : 0.5 : 80) 혼합액 10 mL를 용출하여 앞의 용출액과 합치고 여기에 아세톤 : 메탄올(50 : 50) 혼합액 20 mL를 용출하여 앞의 용출액과 합친다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소가스를 사용하여 서서히 증발, 건고한 후 메탄올 10 mL를 넣어 녹인다.

다) 클로란슐람메틸 등 나머지 농약실리카겔 카트리지에 메탄올 5 mL, 아세톤 5 mL 및 헥산 20 mL를 2～3 방울/초의 속도로 순차적으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 추출액 2 mL를 카트리지에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출하여 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤 : 트리에틸아민 : 헥산(20 : 0.5 : 80) 혼합액 10 mL과 아세톤 : 메탄올(50 : 50) 혼합액 10 mL를 용출하여 앞의 용출액과 합친다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소가스를 사용하여 서서히 증발, 건고한 후 메탄올 10 mL를 넣어 녹인다.

3) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.

1 : 클로퀸토셋(5.4분), 2 : 메펜피르(17.2분)