7.1.2.22 사이할로프뷰틸(Cyhalofop-butyl), 피리데이트(Pyridate), 퀴잘로포프에틸(Quizalofop-ethyl)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3)표준원액 : 사이할로포프뷰틸, 피리데이트, 퀴잘로포프에틸 표준품을 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE : Z-Sep(Zirconium dioxide-based sorbent)

6)기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료를 10 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 아세토니트릴 20 mL를 넣고(곡류 및 두류의 경우 5 g을 정밀히 달아 물 5 mL를 넣고 30분간 방치한 후 아세토니트릴 10 mL 넣음) 1분간 강하게 흔들어 섞고 무수황산마그네슘 4 g, 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨․1.5 수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨․2수화물 1 g을 넣고 1분간 강하게 흔든 후 4℃, 4,000 G에서 5분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
Z-Sep 75 mg이 담겨 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’에서 얻은 상층액 1.5 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 상층액과 메탄올을 1 : 1로 혼합하고 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼 :C18계 역상 컬럼 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼 온도 : 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 및 5 mM 포름산암모늄 함유 메탄올

(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 및 5 mM 포름산암모늄 함유 물

(3) 농도구배조건

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	5	95
2.0	5	95
4.0	95	5
10.0	95	5
12.0	5	95
15.0	5	95

라) 이동상 유속 : 0.3 mL/분

마) 주입량 : 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode

나) Capillary voltage : 3.9 kV

다) Collision gas : 아르곤(Ar)

분석성분 (Compound)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온(Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
사이할로포프뷰틸 (Cyhalofop-butyl)	357.4	357.1	358	2561)	10
				120	26
피리데이트 (Pyridate)	378.9	378.1	379	2071)	28
				351	10
퀴잘로포프에틸 (Quizalofop-ethyl)	372.8	372.0	373	2991)	20
				91	32

라)액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

1)정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.

1. 사이할로포프뷰틸(9.6분), 2. 퀴잘로포프에틸(10.3분), 3. 피리데이트(12.8분)

*분석기기 : LC(WatersⓇAlience 2695 LC separation module), MS/MS(WatersⓇMicromass Quattro Micro triple quadrupole tandem mass),

컬럼(AgilentⓇZORBAX Eclipse Plus C18, 3.0 mm × 150 mm, 3.5 μm)

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 사이할로포프뷰틸, 피리데이트, 퀴잘로포프에틸을 확인한다.