7.1.2.6 이사-디(2,4-D), 디캄바(Dicamba) 및 사-시피에이(4-CPA)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세톤으로 추출한 후 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 측정한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 플로리실(Florisil) : 컬럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다. 이에 물을 2% 넣고 잘 혼합한다.

4) 표준원액 : 이사-디(2,4-Dichlorophenoxyacetic acid), 디캄바(Dicamba) 및 사-시피에이(4-Chlorophenoxy acetate) 표준품을 각각 아세톤에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액 : 각각의 표준원액을 일정량 취하여 질소가스를 사용하여 용매를 완전히 날려 보낸다. 이하 마. 시험용액의 조제 3) 트리클로로에틸에스텔화에 따라 조작한 후 실온에서 질소가스를 사용하여 용매를 완전히 날려 보내고 잔류물을 헥산에 녹여 적절한 농도로 혼합, 희석한다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g(곡류, 두류는 10 g)을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고 아세톤(곡류, 두류는 물 30%를 함유한 아세톤) 100 mL 및 4 N 염산 5 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞어 추출하여 여과보조제를 깔은 흡인여과기로 여과한다. 잔류물은 다시 아세톤(곡류, 두류는 물 30%를 함유한 아세톤) 100 mL를 넣고 동일한 방법으로 5분간 추출하여 여과한다. 여과액을 합쳐 40℃ 이하에서 아세톤을 감압 농축하여 날려 보낸다. 이 수용액을 미리 5% 염화나트륨용액 200 mL를 넣은 분액깔때기에 옮겨 pH 1 이하인 것을 확인하고 에틸아세테이트 100 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 에틸아세테이트층을 취한다. 물층에 다시 에틸아세테이트 100 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 앞의 에틸아세테이트층에 합친다. 에틸아세테이트층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수하고 무수황산나트륨을 다시 에틸아세테이트 약 20 mL로 씻는다. 에틸아세테이트를 40℃ 이하에서 약 1 mL가 남을 정도까지 농축하고 다시 실온에서 질소가스를 사용하여 용매를 완전히 날려 보낸다. 잔류물을 헥산 10 mL로 녹여 분액깔때기에 옮기고 이에 헥산포화아세토니트릴 30 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 아세토니트릴층을 다른 분액깔때기에 취한다. 헥산층에 다시 헥산포화아세토니트릴 30 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 아세토니트릴층을 앞의 분액깔때기에 합쳐 아세토니트릴포화헥산 50 mL로 씻은 후 이를 40℃ 이하에서 약 1 mL가 남을 정도까지 감압 농축하고 다시 실온에서 질소가스를 사용하여 용매를 완전히 날려 보낸다.

2) 가수분해 및 정제
위의 잔류물을 메탄올 20 mL로 녹이고 이에 1.5 N 수산화나트륨용액 10 mL를 넣어 길이 1 m의 유리관을 달아 80℃의 수욕상에서 30분간 반응시킨 후 40℃ 이하에서 메탄올을 감압 농축하여 거의 날려 보낸다. 잔류물은 유리솜을 깔은 여과지로 여과하여 분액깔때기에 옮기고 다시 여과지를 소량의 물과 아세톤으로 씻는다. 이에 포화염화나트륨용액 50 mL 및 에테르 50 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 에테르층은 버린다. 물층을 다시 4 N 염산으로 pH 1 이하로 하여 에틸아세테이트 50 mL를 넣고 위와 같이 2회 되풀이한다. 에틸아세테이트층을 합쳐 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수하고 무수황산나트륨을 다시 에틸아세테이트 20 mL로 씻은 후 이를 40℃ 이하에서 약 1 mL가 남을 정도까지 감압 농축하고 다시 실온에서 질소가스를 사용하여 용매를 완전히 날려 보낸다.

3) 트리클로로에틸에스텔화
위의 잔류물에 트리클로로에탄올 1 mL, 2% 디사이클로헥실카보디아미드(N, N- dicyclohexylcarbodimide : DCC), 피리딘용액 0.5 mL를 넣고 마개를 하여 60℃의 수욕상에서 60분간 반응시킨다. 식힌 후 소량의 아세톤과 헥산 50 mL로 분액깔때기에 옮기고 이에 2% 탄산수소나트륨용액 50 mL를 넣어 약 30초간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 물층을 즉시 버린다. 헥산층에 0.5 N 염산 50 mL, 다음에 물 50 mL로 5분간 강하게 흔들어 섞는다. 헥산층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수하고 무수황산나트륨을 다시 헥산 약 20 mL로 씻은 후 이를 40℃ 이하에서 약 1 mL가 남을 정도까지 감압 농축한다. 주1) 이사-디의 트리클로로에틸에스텔은 알카리용액하에서 가수분해되므로 이 세척조작은 1분 이내에 끝나도록 한다.

4) 정제
안지름 15 mm의 컬럼관에 플로리실 10 g, 다음에 무수황산나트륨 3 g을 각각 헥산에 현탁시켜 충전한 후 그 상단에 소량의 헥산이 남을 정도까지 유출시켜 버린다. 이 컬럼에 위의 농축액을 넣고 30% 벤젠함유헥산 100 mL로 유출시킨 후 50% 벤젠함유헥산 100 mL로 용출하여 받는다. 용출액을 40℃ 이하에서 1 mL가 남을 정도까지 감압 농축하고 다시 실온에서 질소가스를 사용하여 용매를 완전히 날려보낸 후 잔류물을 헥산에 녹여 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼충전제

(1)고정상담체 : 기체크로마토그래프용 크로모솔브 W(HP), 크로모솔브 W(AW-DMCS) 및 가스크롬 Q(80～100 mesh) 또는 이와 동등한 것

(2)고정상액체 : 5% QF-1, 5% SE-30, 5% OV-275, 5% XE-60 및 2% DEGS＋0.5% 인산

나) 컬럼 : 안지름 2～3 mm, 길이 100～200 cm의 유리관

다) 주입부 온도 : 200～250℃

라) 오븐 온도 : 180～220℃

마) 검출기 온도 : 250～280℃

바) 이동상가스 및 유속 : 질소(N2), 20～50 mL/분

2) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

사. 정성시험표준용액 및 시험용액의 일정량을 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크를 표준용액의 피크와 비교할 때 어느 분석조건에서도 그 머무름 시간은 일치하여야 한다. 다만, 머무름 시간은 필요에 따라서 컬럼충전제 2개 이상을 선정하여 기체크로마토그래피를 한 결과에 따른다.

바. 정량시험정성시험 결과 얻어진 크로마토그램상의 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.