7.1.2.7 아조사이클로틴(Azocyclotin) 및 사이헥사틴(Cyhexatin)

가. 시험법 적용범위서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세톤과 브롬산으로 추출한 후 실리카 컬럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 측정한다.주1) 아조사이클로틴의 경우 추출과정 중 사이헥사틴으로 전환됨

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 실리카(silica) : 컬럼크로마토그래피용 실리카(70～230 mesh)를 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

4) 표준원액 : 사이헥사틴 표준품을 메탄올에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 25 g을 정밀히 달아 삼각플라스크에 넣고 아세톤 80 mL와 브롬산 5 mL를 차례로 넣어 5분간 흔들어 섞어 추출한 후 여과지를 깔은 흡인여과기로 여과한다. 용기를 아세톤 20 mL를 넣어 세척하고 앞의 여과액과 합한다. 합친 여과액을 1,000 mL 분액깔때기로 옮기고 포화염화나트륨용액 50 mL, 물 400 mL 및 디클로로메탄 : 헥산(20 : 80) 혼합액 100 mL를 넣고 1분간 강하게 흔든 후 정치하여 층을 분리시킨다. 유기용매층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수하고 40℃에서 감압 농축한다. 잔류물을 아세토니트릴 10 mL에 녹인다.

2) 정제
안지름 11 mm의 컬럼관에 실리카 5 g과 무수황산나트륨을 1 cm 높이로 충전시키고 아세토니트릴 25 mL를 유출시켜 버린다. 아세토니트릴로 녹인 시료용액 10 mL를 가한 후 여분의 아세토니트릴 5 mL로 유출시켜 버린다. 컬럼에 다시 아세토니트릴 50 mL를 넣어 유출시켜 버리고, 아세토니트릴 : 초산(100 : 0.2) 혼합액 30 mL를 넣어 용출하여 받는다. 용출액을 40℃에서 감압 농축 하여 잔류물을 5 mM 염화나트륨 함유 아세토니트릴 : 1 mM 염산(85 : 15) 혼합액 10 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼 : C18(3.9 mm × 150 mm, 4 μm)

나) 컬럼온도 : 40℃

다) 이동상 : 염화나트륨 5 mM 함유 아세토니트릴과 1 mM 염산(85 : 15)의 혼합액

라) 이동상 유속 : 1 mL/분

마) 검출파장 : 214 nm

2) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.

사이헥사틴(9.9분) 50 ng

4) 정량한계
0.04 mg/kg

사. 정성시험위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 분석조건에서도 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.