7.1.2.10벤설탑(Bensultap), 카탑(Cartap), 티오사이클람(Thiocyclam) 및 티오설탑(Thiosultap)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료 중 벤설탑, 카탑, 티오사이클람 및 티오설탑을 2% 시스테인 용액, 3% 염화니켈 용액 및 암모니아수를 사용하여 네레이스톡신(Nereistoxin)으로 전환시켜 헥산 및 에틸아세테이트로 액-액 분배하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-불꽃광도검출기(GC-FPD, 황용 간섭필터, 파장 394 nm)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 네레이스톡신(Nereistoxin oxalate) 표준품을 메탄올에 녹여 500 mg/L 가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 0.1 0.2, 0.5, 1.0, 2.0, 5.0 mg/L가 되게 한 후 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다. 단, 벤설탑은 환산계수 2.9[벤설탑의 분자량(432)/네레이스톡신(Nereistoxin) 분자량(149)], 카탑은 환산계수 1.6[카탑의 분자량(237)/네레이스톡신(Nereistoxin) 분자량(149)], 티오사이클람은 환산계수 1.2[티오사이클람의 분자량(181)/네레이스톡신(Nereistoxin) 분자량(149)], 티오설탑은 환산계수 2.1[티오설탑의 분자량(309)/네레이스톡신(Nereistoxin) 분자량(149)]을 곱하여 환산한다.

5) 2% 시스테인(Cysteine) 용액 : 무수염산시스테인(L-cysteine-HCl, anhydrous) 20 g을 0.02 N 염산 용액 950 mL에 녹인 후 10 N 수산화나트륨 용액을 넣어 pH 4로 맞춘 다음 0.02 N 염산 용액을 넣어 1,000 mL가 되게 한다.

6) 3% 염화니켈(nickel chloride) 용액 : 염화니켈 3 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 25 g을 정밀히 달아 250 mL 폴리프로필렌 원심분리기용 튜브에 넣고 2% 시스테인 용액 150 mL를 넣은 후 30분간 흔들어 섞어 추출한다. 이를 9,900 G, 4℃에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한 후 상층액 120 mL를 별도의 250 mL 폴리프로필렌 원심분리기용 튜브에 취한다. 여기에 3% 염화니켈 용액과 진한 암모니아수를 각각 4 mL씩 첨가한 다음 5분간 흔들어 섞은 후 70℃ 수욕상에서 1시간 동안 흔들어 섞어 반응시킨다. 반응이 끝난 추출액을 냉각시킨 다음 10 N 황산 용액을 넣으면서 pH 5로 맞춘 후 헥산 50 mL를 넣어 흔들어 섞는다. 이를 9,900 G, 4℃에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한 후 상층액을 버린 다음 10 N 수산화나트륨 용액을 넣으면서 pH 9로 맞춘다. 여기에 염화나트륨 12 g과 에틸아세테이트 100 mL를 가한 후 흔들어 섞고, 다시 7,600 G, 4℃에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한 다음 상층액(에틸아세테이트층) 80 mL를 감압농축플라스크에 취하여 40℃에서 감압 농축한 후 잔류물을 메탄올 2 mL로 녹여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼 : DB-5(30 m × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유속 : 헬륨(He), 15 mL/분

다) 주입부 온도 : 230℃

라) 오븐 온도 : 100℃

마) 검출기 온도 : 250℃

바) 주입모드 : 직접주입

사) 주입량 : 2 μL

2) 검량선 작성
표준용액 0.025, 0.05, 0.1, 0.5, 1.0, 2.0 mg/L를 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.

네레이스톡신(4.9분)

4) 정량한계
0.03 mg/kg

사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 네레이스톡신을 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 분석조건

가) 컬럼 : DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유속 : 헬륨(He), 1 mL/분

다) 주입부 온도 : 230℃

라) 오븐 온도 : 70℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 10℃/분의 비율로 150℃까지 온도를 상승시켜 5분간 유지한다.

마) 인터페이스 온도 : 280℃

바) 이온원 온도 : 230℃

사) 주입모드 : Splitless mode

아) 주입량 : 2 μL

자) 분자량 범위 : 50～200m/z

차) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	이온 (m/z)
네레이스톡신 (Nereistoxin)	8.9	149.3	149, 70, 103

(주. 분자량은 티오설탑이 전환된 네레이스톡신(Nereistoxin)의 분자량임)