7.1.3.6 클로르메쾃(Chlormequat)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 메탄올로 추출한 후 양이온 교환수지 컬럼크로마토그래피로 정제하고 페닐티오화합물 합성반응을 거쳐 기체크로마토그래프로 측정한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-질소․인 검출기(GC-NPD)

2) 트리나트륨벤젠치오라이트 합성장치

A : 톨루엔 주입구

B : 트랩

C : 히터

D : 2구 둥근바닥플라스크

E : 냉각관

트리나트륨벤젠치오라이트 합성장치

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 알루미나(Alumina, 염기성) : 컬럼크로마토그래피용 알루미나(63～200 μm, 염기성)를 650℃에서 6시간 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.(이 때 수분함량은 0.1% 이하이어야 한다).

4) 합성제오라이트 : 입자의 크기 0.3 μm

5) 트리나트륨벤젠치오라이트 : 치오페놀 20 g을 나트륨벤젠치오라이트 합성장치의 2구 둥근바닥플라스크에 취하고, 합성제오라이트를 이용하여 건조시킨 에탄올 25 mL를 넣어 잘 혼합한다. 다시 수산화나트륨 5 g을 넣고 마개를 하여 75℃로 가열하여 녹인다. 이에 톨루엔 400 mL를 넣은 후 상압하에 증류한다. 톨루엔의 유출이 시작된 후 나트륨벤젠치오라이트 합성장치의 톨루엔 주입구에 톨루엔을 넣고 2구 둥근바닥플라스크내의 용량을 일정하게 유지하면서 2시간 증류한다. 계속해서 2구 둥근바닥플라스크의 잔류물을 유리여과기(G2)를 사용하여 질소가스를 통하면서 흡인 여과한다. 유리여과기상의 잔류물을 톨루엔 20 mL로 씻고 마개 달린 삼각플라스크에 옮긴다. 이에 합성제오라이트로 건조한 에탄올∶합성제오라이트로 건조한 에틸아세테이트(40 : 1) 혼합액 50 mL에 녹이고 실온에서 60시간 방치한 후 질소가스를 통과하면서 흡인 여과한다. 여과액을 나트륨벤젠치오라이트 합성장치의 2구 둥근바닥플라스크에 옮기고 톨루엔 400 mL를 넣은 후 위와 같이 되풀이하여 증류한다. 다시 2구 둥근바닥플라스크의 잔류물을 유리여과기(G2)를 사용하여 질소가스를 통과하면서 흡인 여과한다. 유리여과기상의 결정을 톨루엔 20 mL로 씻고 오산화인 및 파라핀을 넣은 데시케이터에서 65시간 흡인건조시켜 나트륨벤젠치오라이트를 얻는다(나트륨벤젠치오라이트는 밀봉 용기에 넣어 냉동고에 보관한다).

6) 표준원액 : 표준품(Chlormequat chloride)을 아세톤에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

7) 표준용액 : 표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

8) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 분액깔때기에 넣고 물∶메탄올(1 : 4) 혼합액 100 mL를 넣어 30분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리하고 여과보조제를 깔은 흡인여과기로 여과한다. 잔류물은 다시 분액깔때기에 넣고 메탄올 50 mL를 넣어 30분간 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리하여 동일한 방법으로 여과한다. 여과액을 합쳐 40℃ 이하에서 메탄올을 감압 농축하여 거의 날려보낸다. 물층에 메탄올 25 mL, 물 20 mL 및 여과보조제 2 g을 넣고 천천히 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리하여 여과한다. 다시 물 : 메탄올(2 : 1) 혼합액 75 mL로 위의 농축플라스크를 씻고 여과보조제 2 g을 넣어 위와 같이 되풀이하여 여과한다. 다시 물 30 mL로 여지상의 잔류물을 씻고 여과하여 여과액을 합친다.

2) 정제
안지름 15 mm, 길이 300 mm의 컬럼관에 강산성 양이온교환수지(74～149 μm) 12 mL를 물에 현탁시켜 충전한 후 그 상단에 소량의 물이 남을 정도까지 유출시켜 버린다. 이 컬럼에 8 N 염산 25 mL를 넣고 유출액의 pH가 6～7이 되도록 물로 씻고 다시 물 : 메탄올(1 : 1) 혼합액 50 mL로 유출시켜 버린다. 이 컬럼에 위의 여과액을 넣고 물 : 메탄올(1 : 1) 혼합액 50 mL, 다음에 0.5 N 염산 200 mL로 유출시켜 버린 후 8 N 염산 35 mL로 용출한다. 용출액을 50℃ 이하에서 염산을 감압 농축한다. 잔류물을 에틸아세테이트 : 메탄올(6 : 4) 혼합액 10 mL에 녹인다. 안지름 15 mm, 길이 300 mm의 컬럼관에 알루미나 10 g, 다음에 무수황산나트륨 5 g을 각각 에틸아세테이트 : 메탄올(6 : 4) 혼합액에 현탁시켜 충전한 후 그 상단에 소량의 에틸아세테이트 : 메탄올(6 : 4) 혼합액이 남을 정도까지 유출시켜 버린다. 이 컬럼에 위의 녹인 액을 넣고 에틸아세테이트 : 메탄올(6 : 4) 혼합액 160 mL를 넣고 처음의 40 mL는 유출시켜 버리고 다음의 용출액 120 mL를 받아 40℃ 이하에서 에틸아세테이트 및 메탄올을 감압 농축하여 날려보낸다.

3) 페닐티오화합물 합성반응
위의 농축플라스크 중의 잔류물에 건조된 메틸에틸케톤에 대해 0.6%의 나트륨벤젠치오라이트를 현탁시킨 액 2 mL를 넣고 농축플라스크 중의 공기를 질소로 치환시켜 마개를 하여 때때로 흔들어 섞으면서 80℃에서 30분간 방치한 후 분액깔때기(Ⅰ)에 옮긴다. 메틸에틸케톤 4 mL로 위의 농축플라스크를 씻은 후 펜탄(pentane) 8 mL로 위와 같이 되풀이하여 씻고 이 씻은 액을 분액깔때기에 (Ⅰ)에 합친다. 이에 0.5 M 구연산용액 4 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 물층을 분액깔때기(Ⅱ)에 옮긴다. 유기용매층에 0.5 M 구연산용액 4 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 물층을 분액깔때기(Ⅱ)에 합친다. 이에 4 M 구연산삼칼륨용액 : 4 N 수산화나트륨용액(1 : 1) 혼합액 7 mL와 에틸아세테이트 : 헥산(1 : 1) 혼합액 8 mL를 넣고 15초간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 즉시 물층을 버린다. 유기용매층을 여과지에 소량의 무수황산나트륨을 깔고 여과한다. 여지상의 잔류물을 소량의 에틸아세테이트 : 헥산(1 : 1) 혼합액으로 씻고 여과한다. 여과액을 합쳐 에틸아세테이트 : 헥산(1 : 1) 혼합액을 넣어 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼충전제

(1) 고정상담체 : 기체크로마토그래프용 규조토(149～177 μm)를 6 N 염산으로 2시간 환류시켜 씻고 물로 유출액이 중성이 될 때까지 씻은 후 건조하여 메틸실라잔처리[트리메틸클로르실란 : 피리딘 : 헥사메틸디실라잔(1 : 5 : 3) 혼합액에 침지하여 10분간 물로 씻고 건조한다]한다.

(2) 고정상액체 : 5% 기체크로마토그래프용 실리콘

나) 컬럼 : 안지름 2～3 mm, 길이 1～1.5 m의 유리관

다) 주입부 및 검출기 온도 : 220～270℃

라) 이동상가스 및 유속 : 질소(N2), N, N-디메틸-2-(페닐티오)-에틸아민이 약 3분에서 유출하는 유속으로 조정하고 공기 및 수소의 유속을 최적조건으로 조정한다.

2) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 표준품에 대하여 마. 시험용액의 조제 3) 페닐티오화합물 합성반응과 똑같이 조작하여 얻어진 것과 일치하여야 한다.

아. 정량시험정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.