7.1.3.9 다미노자이드(Daminozide)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 증류시켜 2-NBH로의 변환한 후 알루미나 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 측정한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3)2-니트로벤조알데히드(2-NB) : 2-NB(2-Nitrobenzaldehyde) 2 g을 메탄올 100 mL에 녹인다.

4) 알루미나(Alumina) : 컬럼크로마토그래피용 알루미나(60～80 mesh)를 280℃에서 4시간 활성화한 후 물 1%를 넣어 잘 혼합한다(마개를 하여 14시간 이상 방치한 후 사용한다).

5) 표준품(Benzaldhyde, 2-Nitrodimethylhydrazon : 2-NBH)의 합성 : 1, 1-디메틸하이드라진(unsymmetrical dimethyl hydrazine∶UDMH) 9 g, 2-니트로벤즈알데히드 7.5 g 및 무수에탄올 150 mL를 플라스크에 넣고 환류냉각관를 달아 2시간 가열 환류한다. 식힌 후 용액 50 mL를 취하여 40℃ 이하에서 에탄올을 감압 농축한다. 따로 안지름 15 mm의 컬럼관에 알루미나 50 g, 다음에 무수황산나트륨 2 g을 각각 헥산에 현탁시켜 충전한 후 그 상단에 소량의 헥산이 남을 정도까지 유출시켜 버린다. 이 컬럼에 위의 농축액을 넣고 5% 에테르함유헥산 250 mL로 용출한다. 용출액을 40℃ 이하에서 용매를 감압 농축하고 다시 실온에서 용매를 진공펌프로 흡인하여 완전히 날려보낸다. 이 담갈색의 2-NBH를 표준품으로 한다(갈색유리병에 넣어 냉장 보관한다).

6) 표준원액 : 2-NBH의 표준품을 벤젠에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

7) 표준용액 : 표준원액을 벤젠에 녹여 적절한 농도로 혼합, 희석한다(사용할 때 만든다.).

8) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 가수분해 및 증류
시료 20 g(곡류, 두류는 10g)을 추출 용기에 넣고 필요하면 물을 적당량 넣어 5분간 강하게 흔들어 추출하고 이를 소량의 물로 씻어 증류플라스크에 넣는다. 이에 아연말 2 g, 50% 수산화나트륨용액 160 mL를 넣어 즉시 증류장치에 연결한다. 포집관은 미리 1 M 인산완충용액(pH 6) 5 mL를 넣어 냉각기의 끝이 잠기도록 하고 얼음으로 냉각하면서 가열증류하여 약 20 mL를 받는다.

2) 2-NBH로의 변환
위에서 받은 증류액에 2-NB 용액 5 mL를 넣고 마개를 하여 흔들어 섞은 후 30℃에서 때때로 가볍게 흔들면서 2시간 반응시킨다. 용액을 분액깔때기에 옮기고 용기를 소량의 물로 씻어 앞의 액에 합친다. 이에 벤젠 10 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 벤젠층을 취한다. 물층에 다시 벤젠 10 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 위의 벤젠층에 합친다. 벤젠층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수하고 다시 컬럼을 벤젠 20 mL로 씻은 후 이를 40℃ 이하에서 감압하여 완전히 날려보낸다. 잔류물을 헥산 : 벤젠(1 : 1) 혼합액 5 mL에 녹인다.

3) 정제
안지름 15 mm의 컬럼관에 알루미나 10 g, 다음에 무수황산나트륨 2 g을 각각 헥산 : 벤젠 (1 : 1) 혼합액에 현탁시켜 충전한 후 그 상단에 소량의 헥산, 벤젠 혼합액이 남을 정도까지 유출시켜 버린다. 이 컬럼에 위의 농축액을 넣고 헥산 : 벤젠(1 : 1) 혼합액 100 mL로 용출한다. 용출액을 40℃ 이하에서 감압 농축하고 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼충전제

(1) 고정상담체 : 크로모솔브 W(HP), 크로모솔브 G(AW-DMCS) 및 가스크롬 Q(80～100 mesh) 또는 이와 동등한 것

(2) 고정상액체 : 10% SP-1000, 3% OV-17 5% 및 XE-60

나) 컬럼 : 안지름 2～3 mm, 길이 100～200 cm의 유리관

다) 주입부 온도 : 250～280℃

라) 오븐 온도 : 150～200℃

마) 검출기 온도 : 280～300℃

바) 이동상가스 및 유속 : 질소(N2), 30～50 mL/분

2) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험표준용액 및 시험용액의 일정량을 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크를 표준용액의 피크와 비교할 때 어느 분석조건에서도 그 머무름 시간은 일치하여야 한다. 다만, 머무름 시간은 필요에 따라서 컬럼충전제 2개 이상을 선정하여 기체크로마토그래피를 한 결과에 따른다.

아. 정량시험정성시험 결과 얻어진 크로마토그램상의 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.