7.1.3.11 플로메토퀸(Flometoquin)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 메탄올로 추출한 후 실리카 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 메탄올에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) 실리카 카트리지(silica cartridge) : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 추출 용기에 담고 메탄올 50 mL를 넣은 후 10분간 흔들어 섞어 추출한다. 추출물은 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과한 뒤 메탄올 20 mL로 잔류물 및 용기를 씻어내려 앞의 여과액과 합친 뒤 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린다. 농축 후 잔류물에 물 100 mL를 넣어 혼합한 후 1 N 수산화나트륨 용액을 천천히 가해 pH 8이 되도록 조절한다. 이를 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 염화나트륨 10 g을 넣고 디클로로메탄 30 mL를 차례로 넣고 강하게 흔든다. 정치시켜 층을 분리시킨 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액층에 디클로로메탄 30 mL를 추가로 넣고 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린 후, 디클로로메탄 5 mL로 녹인다. 지방성 시료(현미, 대두)의 경우 미리 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 30 mL를 잔류물에 넣어 녹인 후 250 mL 분량의 분액깔때기에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL로 2회 분배하여 추출한다. 합친 아세토니트릴층을 40℃에서 감압 농축한 후 잔류물을 디클로로메탄 5 mL로 녹인다.

2) 정제
실리카 카트리지에 디클로로메탄 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 용액 5 mL를 카트리지 상단에 넣어 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 씻어 버리고 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤 : 디클로로메탄(5 : 95) 혼합액 10 mL를 넣어 용출하여 받는다. ‘1) 추출’로부터 얻은 농축플라스크에 아세톤 : 디클로로메탄(10 : 90) 혼합액 5 mL를 넣고 녹인 후 카트리지에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출시켜 받은 후, 아세톤 : 디클로로메탄(20 : 80) 혼합액 10 mL를 용출시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축 후 잔류물에 메탄올을 넣어 최종부피를 10 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼 : C18계 역상 컬럼 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼 온도 : 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴

(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 물

(3) 농도구배조건

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	20	80
2.0	20	80
4.0	80	20
8.5	80	20
10.0	20	80
12.0	20	80

라) 이동상 유속 : 0.2 mL/분

마) 주입량 : 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode

나) Capillary voltage : 1.0 kV

다) Collision gas : 아르곤(Ar)라) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion,m/z)	생성이온(Product ion,m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
플로메토퀸 (Flometoquin)	435.4	435.1	436	3921)	25
				376	28

1)정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.

플로메토퀸(6.3분)

*분석기기 : LC(WatersⓇAcquity UPLC), MS/MS(WatersⓇXevo TQ-S),

컬럼(XBridgeⓇC18, 2.1 mm I.D. × 100 mm L., 3.5 μm)

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 플로메토퀸을 확인한다.