7.1.3.12 노발루론(Novaluron)

가. 시험법의 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세톤으로 추출한 후 액-액 분배 및 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다

다. 장치

1) 액체크로마토그래프
-자외선흡광검출기( HPLC-UVD )

2) 액체크로마토그래프
-질량분석기( LC-MS )

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

3) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴로 10 mg/L가 되도록 혼합, 희석하고 아세토니트릴 : 물(70 : 30) 혼합액을 이용하여 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0 및 2.0 mg/L가 되게 한다.

4) 플로리실( Florisil ) : 컬럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

5) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 25 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류, 두류 등 건조 시료의 경우 물 40 mL를 넣고 10분간 방치) 아세톤 100 mL를 넣은 후 1시간 동안 강하게 흔들어 섞어 추출한다. 여지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고, 아세톤 50 mL로 잔류물 및 용기를 씻어 내려 앞의 여과액과 합친다. 합친 여과액은 1 L 용량의 분액깔때기에 옮겨 물 450 mL와 포화염화나트륨 용액 50 mL를 넣은 후 헥산 100 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들고 난 후 정치하여 층을 분리시킨다. 수용액층을 별도의 1 L 분액깔때기에 옮기고 헥산층은 무수황산나트륨에 통과시킨다. 수용액층에 다시 헥산 50 mL를 넣어 위의 과정을 되풀이 한다. 헥산용액을 40℃ 이하에서 감압 농축한 후 잔류물을 헥산 10 mL에 녹인다.

2) 정제
안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 컬럼관에 플로리실 10 g, 다음에 무수황산나트륨 약 2 g을 충전한 후 헥산 50 mL를 넣어 상단에 소량의 헥산이 남을 정도로 유출시켜 버린다. 여기에 위의 헥산에 녹인 용액 10 mL를 컬럼에 넣고 약 3 mL/분의 유속으로 흘린다. 흡착제 표면이 노출되기 직전 아세톤 : 헥산(5 : 95) 혼합액 100 mL를 넣어 유출시켜 버리고, 아세톤 : 헥산(25 : 75) 혼합액 100 mL로 용출하여 받는다. 이 용출액을 40℃ 이하에서 감압 농축하고 잔류물을 아세토니트릴 6 mL에 잘 녹이고 물 4 mL를 넣은 후 혼합하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼 : C18(4.6 mm × 250 mm, 5 ㎛)

나)검출파장: 254 nm

다) 컬럼 온도 : 40℃

라) 이동상 : 아세토니트릴과 물(65 : 35)의 혼합액

마) 이동상 유속 : 1.0 mL/분

바) 시료 주입량 : 20 μL

2) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.

노발루론(13.9분) 10 ng

3) 정량한계
0.02 mg/kg

사. 정량시험위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 노발루론을 확인할 수 있다.

1) 액체크로마토그래프․질량분석기의 분석조건

가) 컬럼 : C18(2.0 mm × 150 mm, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼 온도 : 30℃

다) 이동상 : 아세토니트릴과 물(65 : 35)의 혼합액

라) 이동상 유속 : 0.2 mL/분

마) 주입량 : 10 μL

바) 이온화 : ESI negative-ion mode

사) 분자량 범위 : 100～600m/z

아) 캐필러리 온도 : 350℃

자) Cone voltage : -80 V

차) 액체크로마토그래프․질량분석기의 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	이온 (m/z)
노발루론 (Novaluron)	10.2	492.7	491, 471