7.1.3.13 에톡시퀸(Ethoxyquin)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세톤으로 추출하고, 탄산나트륨용액으로 pH를 조절한 후 헥산으로 액-액 분배한다. 카본-아미노프로필 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-형광검출기(HPLC-FLD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴로 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 카본-아미노프로필 카트리지(carbon amino-propyl cartridge) : 카본(500 mg)-아미노프로필(500 mg) 고정상이 상하로 충전 되어있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류, 두류 등 건조 시료의 경우 10% 탄산나트륨 수용액 20mL를 넣고 30분 방치) 아세톤 100 mL를 넣어 5분간 흔들어 섞어 추출한다. 추출액을 3,500 rpm에서 약 5분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다. 500 mL 용량의 분액깔때기에 포화염화나트륨용액 20 mL와 물 100 mL를 차례로 넣은 후 10% 탄산나트륨 수용액을 이용하여 pH를 7～9 정도로 조절 한 후, 상부 아세톤 추출액 50 mL를 넣는다. 여기에 헥산 30 mL를 넣어 15분간 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨다. 헥산층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 위 과정을 1회 반복하여 앞서 받은 헥산층과 합하여 40℃ 이하에서 감압 농축, 건고하고 잔류물을 메탄올 : 디클로로메탄(1 : 99) 혼합액 5 mL에 녹인다.

2) 정제
카본-아미노프로필 카트리지에 디클로로메탄 5 mL를 2～3방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 추출액 중 5 mL를 카트리지에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출시켜 받고 고정상 상단이 노출되기 전에 메탄올 : 디클로로메탄(1 : 99) 혼합액 5 mL를 넣고 용출하여 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축 후 잔류물에 아세토니트릴을 넣어 최종부피 5 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼 : C18계 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼 온도 : 40℃

다) 이동상 : BHT(buthylatedhydroxytoluene) 50 mg/L 함유 아세토니트릴과 물(75 : 25)의 혼합액

라) 이동상 유속 : 1.0 mL/분

마) 검출파장 : 여기파장 360 nm, 형광파장 435 nm

바) 주입량 : 10 μL

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.

*컬럼 : Capcell pak C18MGⅡ, 4.6 mm I.D. × 250 mm L., 5.0 μm

4) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 에톡시퀸을 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기

가) 컬럼 : C18(Kinetex, 2.1 mm × 100 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼 온도 : 40℃

다) 이동상 : 아세토니트릴과 물(50 : 50)의 혼합액

라) 이동상 유속 : 0.2 mL/분

마) 주입량 : 5 μL

바) 이온화 : ESI positive-ion mode

사) 분자량 범위 : 50～300m/z

아) Cone voltage : 100 V

자) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

물질명 (Compound)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion,m/z)	생성이온(Product ion,m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
에톡시퀸 (Ethoxyquin)	217.3	217.1	218	160	47
				174	43
				148	29