7.1.3.15 이프로디온(Iprodione)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세토니트릴로 추출한 후 헥산 및 디클로로메탄으로 액-액 분배하고 실리카 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프-질량분석기로 측정한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 실리카(silica) : 컬럼크로마토그래피용 실리카(70～230 mesh)를 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

4) 표준원액 : 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액 : 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 25 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류, 두류 등 건조 시료의 경우 물 20 mL를 넣고 30분간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 섞어 추출한다. 여기에 아세토니트릴 100 mL를 넣고 2분간 흔들어 섞은 후 여지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고, 잔류물은 아세토니트릴 40 mL로 잔류물 및 용기를 씻어 내려 위의 여과액과 합한 후 분액깔때기에 옮기고 물 450 mL와 포화염화나트륨용액 50 mL를 넣은 후 100 mL의 헥산 : 디클로로메탄(20 : 80) 혼합액을 넣어 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨다. 아래의 헥산 : 디클로로메탄(20 : 80) 혼합액층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하고 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린다. 잔류물에 아세토니트릴포화헥산 40 mL를 넣어 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮긴다. 헥산포화아세토니트릴을 40 mL를 분액깔때기에 넣어 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨다. 분리된 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 농축플라스크에 옮기고, 분액깔때기에 남은 헥산 용액에 다시 헥산포화아세토니트릴 40 mL를 넣어 위의 과정을 총 2회 되풀이 한다. 합친 아세토니트릴 여과액을 40℃ 이하에서 감압 농축하여 날려버리고 헥산 10 mL를 넣어 녹인다.

2) 정제
안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 유리컬럼관에 실리카겔 10 g을 충전하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 충전한 후 헥산 50 mL를 넣어 상단에 소량의 용액만이 남을 정도로 유출시켜 버린다. 여기에 ‘1) 추출’에서 얻은 헥산용액 10 mL를 넣은 후 약 3 mL/분의 유속으로 유출시켜 버린다. 충전제 표면이 노출되기 직전 다시 헥산 : 디클로로메탄(70 : 30) 혼합액 100 mL와 헥산 : 디클로로메탄 : 아세토니트릴(50 : 49 : 1) 혼합액 150 mL를 차례로 컬럼에 유출시켜 버린다. 계속해서 헥산 : 디클로로메탄 : 아세토니트릴(50 : 43 : 7) 혼합액 150 mL를 컬럼에 용출하여 받은 후 40℃ 이하에서 감압 농축하여 잔류물에 헥산을 넣어 최종부피가 10 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼 : DB-17(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유속 : 질소(N2), 2 mL/분

다) 오븐 온도 : 시료를 주입하고 170℃에서 5℃/분의 비율로 온도를 220℃로 상승시켜 2분간 유지한 후 220℃에서 260℃까지 10℃/분로 승온시키고 260℃에서 280℃까지 20℃/분의 속도로 승온한 뒤 13분간 유지한다.

라) 주입부 온도 : 280℃

마) 검출기 온도 : 300℃

바) 주입량 : 1 μL, splitless

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.

이프로디온(15.9분)

4) 정량한계
0.04 mg/kg

바. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

사. 확인시험기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 이프로디온을 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 분석조건

가) 컬럼 : DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유속 : 헬륨(He), 3 mL/분

다) 오븐 온도 : 시료를 주입하고 120℃에서 2분간 유지한 뒤 20℃/분의 비율로 온도를 160℃로 상승시킨 뒤 5℃/분의 비율로 온도를 180℃까지 올린 후 4분간 유지하고 20℃/분의 속도로 300℃까지 승온시킨 뒤 12분간 유지한다.

라) 주입부 온도 : 200℃

마) 인터페이스 온도 : 230℃

바) 이온원 온도 : 250℃

사) 주입량 : 2 μL, splitless

아) 분자량 범위 : 50～400m/z자) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
이프로디온 (Iprodione)	15.9	330.2	329.0	314